人類γ基因啟動子上游的調控序列中含有BCL11A蛋白結合位點，該位點結合BCL11A蛋白后，γ基因的表達被抑制。通過改變該結合位點的序列，解除對γ基因表達的抑制，可對某種地中海貧血癥進行基因治療。科研人員擴增了γ基因上游不同長度的片段，將這些片段分別插入表達載體中進行轉化和熒光檢測，以確定BCL11A蛋白結合位點的具體位置。相關信息如圖所示。
（1）圖中啟動子是 RNA聚合酶RNA聚合酶識別和結合位點，且啟動子是具有方向性的，目的基因只有正確插入啟動子和終止子之間才能正確表達。在表達載體中綠色熒光蛋白基因作為 標記基因標記基因，要使其成功表達，圖b中還缺啟動子，請判斷即將插入的啟動子方向 向左向左（填“向左”或“向右”）。
（2）利用PCR技術擴增γ基因上游不同DNA片段的原理是 DNA雙鏈復制DNA雙鏈復制，為使PCR反應體系中的模板解鏈為單鏈，需要滿足的條件是 加熱至90-95℃加熱至90-95℃。
（3）將擴增后的產物定向插入載體指導綠色熒光蛋白基因表達，需要在引物末端添加限制酶識別序列。據圖可知，在R末端添加的序列所對應的限制酶應為 EcoRIEcoRI，在F1～F7末端添加的序列所對應的限制酶是 SalISalI。
（4）從產物擴增到載體構建完成的整個過程中，除限制酶外，還必須用到的工具酶有DNA連接酶和 耐高溫的DNA聚合酶耐高溫的DNA聚合酶。
（5）將構建的載體導入除去BCL11A基因的受體細胞，成功轉化后，含F1～F6與R擴增產物的載體表達熒光蛋白，受體細胞有熒光，含F7與R擴增產物的受體細胞無熒光。含F7與R擴增產物的受體細胞無熒光的原因是 F7與R擴增產物不含完整的啟動子，熒光蛋白基因不表達F7與R擴增產物不含完整的啟動子，熒光蛋白基因不表達。
（6）向培養液中添加適量的雌激素，含F1～F4與R擴增產物的受體細胞不再有熒光，而含F5～F6與R擴增產物的受體細胞仍有熒光。若γ基因上游調控序列上與引物序列所對應的位置不含有BCL11A蛋白的結合位點序列，據此結果可推測，BCL11A蛋白結合位點位于 引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區段上引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區段上。
【答案】RNA聚合酶；標記基因；向左；DNA雙鏈復制；加熱至90-95℃；EcoRI；SalI；耐高溫的DNA聚合酶；F7與R擴增產物不含完整的啟動子，熒光蛋白基因不表達；引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區段上
【解答】
【點評】
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發布：2024/5/15 8:0:8組卷：37引用：2難度：0.4
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
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（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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