利用枯草芽孢桿菌的發酵可以生產亮氨酸脫氫酶。在啟動子和亮氨酸脫氫酶基因之間插入信號肽（SPY）基因并將重組質粒導入枯草芽孢桿菌構建工程菌，可提高亮氨酸脫氫酶的生產水平。重組質粒的構建如圖所示，KanR為卡那霉素抗性基因，AmpR為氨芐青霉素抗性基因，圖中各限制酶切割產生的黏性末端不同。回答下列問題：
（1）該基因表達載體中除圖中標注外，還應具有終止子、復制原點等結構。啟動子是 RNA聚合酶RNA聚合酶識別和結合的部位，能驅動基因轉錄出mRNA。KanR和AmpR都為抗生素抗性基因，其作用是 便于重組DNA分子的篩選便于重組DNA分子的篩選。
（2）在構建該基因表達載體的過程中，為提高重組率及避免目的基因和質粒自身環化以及目的基因和質粒反向連接，具體操作是 使用限制酶NdeⅠ和BamHⅠ切割目的基因和質粒，再利用DNA連接酶拼接成重組DNA分子使用限制酶NdeⅠ和BamHⅠ切割目的基因和質粒，再利用DNA連接酶拼接成重組DNA分子。
（3）可利用 PCRPCR反應體系擴增亮氨酸脫氫酶基因，該反應需要在一定的緩沖溶液中才能進行，其過程包括 變性變性、復性和延伸三步，其中延伸階段需加入耐高溫的DNA聚合酶，其作用是 催化合成DNA子鏈催化合成DNA子鏈。
（4）將重組質粒導入枯草芽孢桿菌構建工程菌時，一般先用Ca2+處理枯草芽孢桿菌，目的是 使枯草芽孢桿菌處于一種能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態使枯草芽孢桿菌處于一種能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態。利用枯草芽孢桿菌在發酵罐中發酵生產亮氨酸脫氫酶時，要隨時檢測培養液中的 微生物的數量、產物的濃度微生物的數量、產物的濃度（答兩點）等，以了解發酵進程，還要及時添加必需的營養組分，嚴格控制溫度、pH和溶解氧等發酵條件。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】RNA聚合酶；便于重組DNA分子的篩選；使用限制酶NdeⅠ和BamHⅠ切割目的基因和質粒，再利用DNA連接酶拼接成重組DNA分子；PCR；變性；催化合成DNA子鏈；使枯草芽孢桿菌處于一種能吸收周圍環境中DNA分子的生理狀態；微生物的數量、產物的濃度
【解答】
【點評】
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發布：2024/7/17 8:0:9組卷：6引用：2難度：0.6
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發布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6