纖毛是廣泛存在的細胞表面結構,功能異??梢鸲喾N疾病。因此,研究纖毛形成的作用機制具有重要意義。請回答下列問題。

(1)纖毛結構如圖1所示,由細胞膜延伸形成的纖毛膜主要由中心體轉變而來,中心體在有絲分裂中的功能是 參與紡錘體的形成,是紡錘體形成中心參與紡錘體的形成,是紡錘體形成中心。
(2)某病人腎小管上皮細胞纖毛異常,為了分析纖毛相關基因X是否發生了變異,對基因X進行了PCR擴增與產物測序。從細胞樣品中分離DNA時,可通過交替調節鹽濃度將與核蛋白結合的DNA分離出來,溶液中添加NaCl至2.0mo1/L的目的是 溶解DNA溶解DNA。PCR擴增時,需在 耐高溫DNA聚合酶耐高溫DNA聚合酶催化下,在引物 3'3'端進行DNA鏈的延伸,獲得擴增產物用于測序。
(3)為研究蛋白質X在細胞中的定位,構建綠色熒光蛋白GFP與X的融合蛋白,融合蛋白具有綠色熒光,可示其在細胞內位置。將X-GFP基因融合片段M導入如圖Ⅱ所示載體質粒Y,構建Y-M重組質粒(在EcoRV位點插入片段)。請完成如表。
分步實驗目標 | 簡易操作、結果、分析 |
PCR鑒定正向重組質粒Y-M(圖Ⅱ中融合片段M中有白色的箭頭,代表方向) | ①選擇圖Ⅱ引物 a、b a、b ;②PCR目的產物約為 1100 1100 bp。 |
確保M及連接處序列正確,Y-M的連接處上游含有HindⅢ+ECoRⅤ的識別序列,下游含有EcoRⅤ+BamHⅠ的識別序列 | ③質粒測序,圖Ⅲ中正確的是 Q4 Q4 (選填序列編號) |
檢測融合蛋白定位 | ④對照質粒Y-GFP(僅表達GFP)與實驗質粒Y-M分別導入細胞,發現對照組整個細胞均有綠色熒光,而實驗組熒光集中在纖毛基部,說明X蛋白參與 中心體 中心體 的形成。 |
逆轉錄
逆轉錄
形成cDNA作為模板,PCR擴增結果顯示,在總cDNA模板量相等的條件下,健康人Ct值為15,而病人Ct值為20(Ct值是產物熒光強度達到設定閾值時的PCR循環數)。【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定;各類細胞器的結構和功能.
【答案】參與紡錘體的形成,是紡錘體形成中心;溶解DNA;耐高溫DNA聚合酶;3';a、b;1100;Q4;中心體;逆轉錄
【解答】
【點評】
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發布:2024/4/24 14:0:35組卷:27引用:1難度:0.5
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