PCR定點突變技術是最常用的基因突變技術，通過定點誘變可以在體外改造DNA分子。重疊延伸PCR是發展最早的PCR定點突變技術，操作過程如圖1。可通過測序檢驗定點突變是否成功。現欲將改造后的基因構建重組質粒導入大腸桿菌，質粒結構如圖2。回答下列問題：
（1）圖1所示重疊延伸PCR中，第1對引物是 突變引物FP2和通用引物RP2突變引物FP2和通用引物RP2；在第1對引物組成的反應系統和第2對引物組成的反應系統中各進行一次復制，共產生 33種DNA分子；此過程不能將兩對引物共置于同一反應系統中，原因是 突變引物FP2和突變引物RP1可以互補配對，導致引物失效突變引物FP2和突變引物RP1可以互補配對，導致引物失效。
（2）圖1所示DNA分子不能延伸，原因是 DNA單鏈延伸的方向必須是5’到3’DNA單鏈延伸的方向必須是5’到3’。
（3）分析圖1和圖2，要將突變的基因定向插入質粒并構建表達載體，應如何設計通用引物FP1和通用引物RP2？應保證突變基因右側應是CTAG應保證突變基因右側應是CTAG。
（4）為篩選出含有目的基因的大腸桿菌，通常采用影印法（使用無菌的絨氈布壓在培養基A的菌落上，帶出少許菌種，平移并壓在培養基B上，結果如圖3）。培養基A中應添加 氨芐青霉素氨芐青霉素，培養基B中應添加 四環素四環素，含有重組質粒的菌落是 4、64、6（填寫數字），原因是 用兩種限制酶對質粒進行切割時，會破壞四環素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導入重組質粒的農桿菌能在含有氨芐青霉素的培養基上能生存，但不能在含有四環素培養基上生存用兩種限制酶對質粒進行切割時，會破壞四環素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導入重組質粒的農桿菌能在含有氨芐青霉素的培養基上能生存，但不能在含有四環素培養基上生存。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定；基因工程的操作過程綜合．
【答案】突變引物FP2和通用引物RP2；3；突變引物FP2和突變引物RP1可以互補配對，導致引物失效；DNA單鏈延伸的方向必須是5’到3’；應保證突變基因右側應是CTAG；氨芐青霉素；四環素；4、6；用兩種限制酶對質粒進行切割時，會破壞四環素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此導入重組質粒的農桿菌能在含有氨芐青霉素的培養基上能生存，但不能在含有四環素培養基上生存
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：45引用：2難度：0.5
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1．數字PCR技術是一種核酸分子絕對定量技術，其原理如圖所示。下列有關敘述正確的是（ ）
發布：2024/12/30 23:30:2組卷：7引用：2難度：0.6 -
2．科學家為了提高光合作用過程中Rubiaco酶對CO2的親和力，利用PCR定點突變技術改造Rubisco酶基因，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請回答下列問題：
（1）PCR定點突變技術屬于（填“基因工程”或“蛋白質工程”）。可利用定點突變的DNA構建基因表達載體，常用將基因表達載體導入植物細胞，還需用到植物細胞工程中的技術，才能最終獲得轉基因植物。
（2）PCR過程所依據的原理是。利用PCR技術擴增，若將一個目的基因復制10次，則需要在緩沖液中至少加入個引物。
（3）目的基因進入受體細胞內，并在受體細胞內維持穩定和表達的過程稱為。科研人員通過實驗研究發現培育的該轉基因植株的光合作用速率并未明顯增大，可能的原因是。
（4）另有一些科學家利用生物技術將人的生長激素基因導入小鼠受精卵的細胞核中，經培育獲得一種轉基因小鼠，其膀胱上皮細胞可以合成人的生長激素并分泌到尿液中。有關敘述錯誤的是。
A．選擇受精卵作為外源基因的受體細胞是因為這種細胞的全能性最容易表達
B．采用DNA分子雜交技術可檢測外源基因在小鼠細胞內是否成功表達
C．人的生長激素基因能在小鼠細胞表達，說明遺傳密碼在不同種生物中可以通用
D．將轉基因小鼠體細胞進行核移植（克隆），可以獲得多個具有外源基因的后代發布：2025/1/16 8:0:1組卷：14引用：2難度：0.6 -
3．下列關于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ）
發布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7