IKK激酶參與動物體內免疫細胞的分化。臨床上發現某重癥聯合免疫缺陷（SCID）患兒IKKB基內編碼區第1183位硫堿基T突變為C，導致IKK激酶上第395位酪氨酸被組氨酸代替。為研究該患兒發病機制，研究人員利用純合野生鼠，應用大引物PCR定點誘變技術培育出SCID模型小鼠（純合），主要過程如圖1、2所示。分析回答下列問題：

（1）在 PCR反應體系中，除需加入引物、IKKB基因、緩沖液、Mg²⁺等外，還需加入

Taq酶（耐高溫DNA聚合酶/熱穩定DNA聚合酶）、4種脫氧核苷酸（或dNTP）

Taq酶（耐高溫DNA聚合酶/熱穩定DNA聚合酶）、4種脫氧核苷酸（或dNTP）

等成分。
（2）在圖1獲取突變基因過程中，需要以下3種引物：

引物A	5′-CCCCAACCGGAAAGTGTCA-3′（下劃線字母為突變堿基）
引物B	5′-TAAGCTTCGAACATCCTA-3′（下劃線部分分為限制酶HindⅢ識別序列）
引物C	5′-GTGAGCTCGCTGCCCCAA-3′（下劃線部分分為限制酶SacⅠ識別序列）

則 PCR₁中使用的引物有

引物A和引物C

引物A和引物C

，PCR₂中使用的引物有

引物B

引物B

和圖中大引物的

②

②

（填“①”或“②”）鏈。
（3）PCR一般要經歷三十多次循環，每個循環包括變性、復性、延伸三個環節，在第一個循環之前通常
在95℃左右條件下處理數分鐘，稱為預變性，預變性的目的是

增加大分子模板DNA徹底變性的概率

增加大分子模板DNA徹底變性的概率

。
（4）研究人員經鑒定、篩選獲得一只轉基因雜合鼠F₀，并確認突變基因已經穩定同源替代IKKB基因。利用雜合鼠F₀，通過雜交獲得SCID模型鼠，請將實驗思路補充完整：

選F₀與野生鼠雜交，得F₁；讓F₁雌雄鼠隨機交配得F₂

選F₀與野生鼠雜交，得F₁；讓F₁雌雄鼠隨機交配得F₂

；提取F₂中每只小鼠的基因組DNA，通過基因測序選出SCID模型鼠。