養殖家禽的飼料中富含谷物，纖維素是谷物的重要成分，但家禽消化道中缺少能降解纖維素的酶，阻礙了家禽對飼料的吸收與利用。研究人員利用轉基因技術改造乳酸桿菌，將其添加于飼料中，以提高家禽養殖效率。

（1）乳酸桿菌是動物胃腸道的優勢細菌之一。家禽腸道內的乳酸桿菌通過細胞

無氧

無氧

呼吸產生乳酸等代謝產物，常見的乳酸菌除了乳酸桿菌，還有

乳酸鏈球菌

乳酸鏈球菌

。
（2）枯草芽孢桿菌分泌可降解纖維素的一種酶，這種酶由W基因編碼。為在乳酸桿菌中表達W基因，需使用圖1中質粒為載體。圖2為克隆得到的含W基因的DNA片段，W基因以乙鏈為轉錄模板鏈，轉錄時mRNA自身延伸的方向為5′→3′。
①很多啟動子具有物種特異性，在圖1質粒中插入W基因，其上游啟動子應選擇

B

B

（填寫字母）。
A．枯草芽孢桿菌啟動子
B．乳酸桿菌啟動子
C．農桿菌啟動子
②如表是幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中標注了相關限制酶的酶切位點。

限制酶	EcoRⅠ	BamHⅠ	KpmⅠ	MfeⅠ	HindⅡ
識別序列及其切割位點	5′-G↓AATTC-3′ 3′-CTTAA↑G-5′	5′-G↓GATCC-3 3′CCTAG↓G-5	5′-GGTAC↓C-3 3′-C↑CATGG-5	5′-C↓AATTG-3 3′-GTTAA↑C-5	5′A↓AGCTT-3′ 3′-TTCGA↑A-5′

根據上述信息，應使用限制酶

MfeⅠ、HindⅢ

MfeⅠ、HindⅢ

切割圖1中質粒，使用限制酶

EcoRⅠ、HindⅢ

EcoRⅠ、HindⅢ

切割圖2中含W基因的DNA片段，以獲得能正確表達W基因的重組質粒。所得重組質粒轉化乳酸桿菌后，使用含抗生素

氨芐青霉素

氨芐青霉素

的培養基篩選，以得到轉入W基因的乳酸桿菌。
（3）為確定導入重組質粒的乳酸桿菌是否具有分解纖維素的能力，研究人員用液體培養基分別培養下表所示菌種。所得部分菌液接種于固體鑒定培養基上，另取部分菌液上清液測定酶活力，實驗方案及測定結果如表所示。

菌種	酶活性相對值
乳酸桿茵	未檢出
X	未檢出
導入了重組質粒的乳酸桿菌	0.96

①表中的X應為

導入空質粒的乳酸菌

導入空質粒的乳酸菌

。
②在配制固體鑒定培養基時，除加入無機鹽、剛果紅、維生素、氮源、水外，還需要添加

纖維素、瓊脂

纖維素、瓊脂

。導入了重組質粒的乳酸桿菌在此培養基上應出現

以菌落為中心的透明圈

以菌落為中心的透明圈

。