科研人員克隆了豬白細胞抗原基因(SLA-2基因),構建了該基因的真核表達載體,進行了豬腎上皮細胞表達研究。實驗的主要流程如圖1,SLA-2基因長度為1100bp,質粒B的總長度為4445bp,其限制酶切點后的數字表示距復制原點的距離。請回答:

限制酶 | BclⅠ | NotⅠ | XbaⅠ | San3AⅠ |
識別序列及切割位點 | T↓GATCA | GC↓GGCCGC | T↓CTAGA | ↓GATC |
DNA復制
DNA復制
,下列4種引物中應選擇的是 a、b
a、b
。a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
(2)過程②將重組質粒導入大腸桿菌的目的是
擴增重組DNA分子
擴增重組DNA分子
,該過程需要用 Ca2+
Ca2+
處理大腸桿菌,使其成為感受態細胞。然后將大腸桿菌涂布在含有 氨芐青霉素
氨芐青霉素
(抗生素)的培養基上培養。(3)若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質粒C后電泳,請在答題紙相應位置畫出可能得到的電泳條帶。
(4)科研中常用嘌呤霉素對真核細胞進行篩選,一般選擇最低致死濃度的前一個濃度作為篩選濃度的原因是:既可以讓大部分沒有抗性的細胞死亡又不會讓
具有抗性的細胞死亡
具有抗性的細胞死亡
。實驗結果如圖2,根據實驗結果最佳的嘌霉素篩選濃度為 80ug/mL
80ug/mL
。(5)過程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測腎上皮細胞生產的抗原肽,其原理是
抗原-抗體雜交
抗原-抗體雜交
,單克隆抗體能檢測其是否具有正確的 抗原肽
抗原肽
,從而是否具有生物活性。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定;單克隆抗體及其應用.
【答案】DNA復制;a、b;擴增重組DNA分子;Ca2+;氨芐青霉素;具有抗性的細胞死亡;80ug/mL;抗原-抗體雜交;抗原肽
【解答】
【點評】
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發布:2024/12/15 6:30:1組卷:47引用:3難度:0.6
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