近年來，科學家利用基因工程技術創造出許多優良品種或產品。如圖為獲得抗除草劑轉基因玉米的技術路線，其中含有內含子的報告基因只能在真核生物中正確表達，其產物能催化無色物質K呈現藍色。請回答以下問題：
（1）獲得抗除草劑轉基因玉米的過程中核心步驟是基因表達載體構建基因表達載體構建。
（2）為防止酶切產物自身環化，需使用22種限制酶，分別對含除草劑抗性基因G的DNA片段和Ti-質粒上的T-DNAT-DNA（填“報告基因”、“T-DNA”、“氨芐青霉素抗性基因”） 進行酶切。
（3）為提高轉化成功率，常用含Ca2+Ca2+的溶液處理土壤農桿菌，使其成為感受態細胞。轉化成功的農桿菌應在含氨芐青霉素氨芐青霉素的培養基上進行篩選1。
（4）農桿菌細胞內“報告基因”表達后不能不能（填“能”或“不能”）能催化無色物質K呈現藍色，原因是報告基因中的內含子轉錄產生的RNA序列在農桿菌中不能被切除，導致農桿菌內“報告基因”翻譯的蛋白質結構不同，不具相應的酶活性，無法催化無色物質K呈現藍色報告基因中的內含子轉錄產生的RNA序列在農桿菌中不能被切除，導致農桿菌內“報告基因”翻譯的蛋白質結構不同，不具相應的酶活性，無法催化無色物質K呈現藍色。
（5）農桿菌轉化愈傷組織的過程中，愈傷組織表面常殘留農桿菌，會導致未轉化的愈傷組織可能在含除草劑的培養基中生長。所以進行過程篩選2時，應在培養基中加入除草劑和物質K除草劑和物質K，并挑選愈傷組織細胞內呈顯藍色愈傷組織細胞內呈顯藍色的植物細胞，進行植物組織培養植物組織培養獲得抗除草劑轉基因玉米幼苗。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】基因表達載體構建；2；T-DNA；Ca2+；氨芐青霉素；不能；報告基因中的內含子轉錄產生的RNA序列在農桿菌中不能被切除，導致農桿菌內“報告基因”翻譯的蛋白質結構不同，不具相應的酶活性，無法催化無色物質K呈現藍色；除草劑和物質K；愈傷組織細胞內呈顯藍色；植物組織培養
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：8引用：4難度：0.7
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（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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