科研人員通過(guò)敲除里氏木霉基因組中去乙酰化酶基因（HDAC），探究組蛋白乙酰化對(duì)纖維素酶基因表達(dá)的影響，其主要過(guò)程如圖1。請(qǐng)據(jù)圖回答問(wèn)題。

（1）PCR反應(yīng)體系中，除加入引物和模板DNA外，一般還需要加入

Taq酶、dNTP（緩沖液、Mg²⁺）等

Taq酶、dNTP（緩沖液、Mg²⁺）等

。在最后一個(gè)循環(huán)結(jié)束后通常還需要維持72℃7min,其目的是

使子鏈充分延伸（或充分反應(yīng)，獲得更多的完整目的片段，或獲得更多的完整目的片段）

使子鏈充分延伸（或充分反應(yīng)，獲得更多的完整目的片段，或獲得更多的完整目的片段）

。
（2）引物設(shè)計(jì)是PCR的關(guān)鍵，本研究中引物R₁的5'端添加與引物Fc互補(bǔ)的序列，其目的是

便于H₁和G^R拼接（便于PCR4時(shí)形成H₁-G^R融合基因）

便于H₁和G^R拼接（便于PCR4時(shí)形成H₁-G^R融合基因）

。在PCR5中加入的引物是

R₂和F_G

R₂和F_G

。
（3）在原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化過(guò)程中，加入適量的CaCl₂和PEG溶液，其目的是

促進(jìn)外源DNA分子進(jìn)入原生質(zhì)體（或使原生質(zhì)體變成感受態(tài)）

促進(jìn)外源DNA分子進(jìn)入原生質(zhì)體（或使原生質(zhì)體變成感受態(tài)）

。涂布時(shí)，涂布器用

灼燒滅菌（或酒精引燃）

灼燒滅菌（或酒精引燃）

法滅菌后將原生質(zhì)體接種到含

新霉素

新霉素

的固體培養(yǎng)基上篩選。
（4）為探究敲除基因HDAG后對(duì)纖維素酶基因（CBHI、EGLI）和纖維素酶基因激活因子基因XYR1轉(zhuǎn)錄的影響，研究中先提取

（培養(yǎng)到第5天的）兩類菌株細(xì)胞的總RNA（或總RNA）

（培養(yǎng)到第5天的）兩類菌株細(xì)胞的總RNA（或總RNA）

，再利用熒光RT-PCR技術(shù)檢測(cè)，結(jié)果如圖2。依據(jù)結(jié)果可以得出的結(jié)論是

敲除基因HDAC使細(xì)胞中組蛋白去乙酰化酶缺乏，細(xì)胞中組蛋白乙酰化程度高，可以顯著提高纖維素酶基因的表達(dá)

敲除基因HDAC使細(xì)胞中組蛋白去乙酰化酶缺乏，細(xì)胞中組蛋白乙酰化程度高，可以顯著提高纖維素酶基因的表達(dá)

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