土壤鹽漬化影響水稻生長發育，將水稻耐鹽堿基因OsMYB56導入不耐鹽堿水稻品種吉粳88中，培育耐鹽堿水稻新品種，其操作流程及可能用到的限制酶如圖，其中bar為抗除草劑基因，Tetr為四環素抗性基因，Amp3為氨芐青霉素抗性基因，①～⑦表示操作過程，請回答下列問題：
| 限制酶 | BamHⅠ | BclⅠ | smaⅠ | Sau3AⅠ |
| 識別位點及切割位點 | -G↓GATCC- | -T↓GATCA- | -CCC↓GGG- | -↓GATC- |
使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸
使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸
；應選用引物組合 a、d
a、d
。a.5'-CTTGGATGAT-3'
b.5'-TAAGTTGTCT-3'
c.5'-TAGTAGGTTC-3'
d.5'-TCTGTTGAAT-3'
e.5'ATTCAACAGA-3'
f.5'ATCATCCAAG-3'
（2）根據基因表達載體的結構組成分析，Ti質粒中的CaMV35S是
啟動子
啟動子
；OsMYB56基因和bar基因編碼鏈的方向 相反
相反
（填“相同”或“相反”）。（3）過程③應選用限制酶
BclⅠ和SmaⅠ
BclⅠ和SmaⅠ
切割質粒，利用所選限制酶進行操作的優勢是 防止酶切后的質粒自身環化，保證OsMYB56和酶切后的質粒定向連接
防止酶切后的質粒自身環化，保證OsMYB56和酶切后的質粒定向連接
，切割后需要用 T4DNA連接酶
T4DNA連接酶
進行連接才能獲得重組質粒。（4）為了篩選出含重組質粒的受體細胞，④過程應在添加
四環素
四環素
的選擇培養基上培養。培養后獲得的菌落不能判定是否含有重組質粒，原因是 含未重組Ti質粒（或普通Ti質粒）的受體細胞也能正常生長
含未重組Ti質粒（或普通Ti質粒）的受體細胞也能正常生長
。（5）轉基因水稻對鹽堿環境具有較強適應性，但安全性也需要引起重視。從基因安全的角度考慮，培育和種植過程需要完成下列哪些工作
ACD
ACD
。A．轉化過程殘留農桿菌及其廢棄的培養基等，需要經滅菌后專門化處理
B．對轉基因水稻進行鹽堿脅迫實驗和除草劑抗性實驗，完成個體生物學水平的鑒定
C．轉基因水稻移植到大田后，要劃定隔離區，防止OsMYB56和bar基因通過花粉傳播
D．進行嚴密的毒理性評價、致敏性評價、營養學評價等食用或飼用安全評估
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸；a、d；啟動子；相反；BclⅠ和SmaⅠ；防止酶切后的質粒自身環化，保證OsMYB56和酶切后的質粒定向連接；T4DNA連接酶；四環素；含未重組Ti質粒（或普通Ti質粒）的受體細胞也能正常生長；ACD
【解答】
【點評】
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發布：2024/7/3 8:0:9組卷：8引用：2難度：0.6
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（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6