生長(zhǎng)素參與植物生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)節(jié)，生長(zhǎng)素運(yùn)輸?shù)鞍祝≒INI）對(duì)IAA的極性運(yùn)輸具有重要作用。為研究35S啟動(dòng)子（一種來(lái)自病毒的強(qiáng)啟動(dòng)子）能否引起下游基因的過(guò)量表達(dá)，研究人員將35S啟動(dòng)子與PINI基因轉(zhuǎn)入擬南芥，觀察PINI過(guò)量表達(dá)對(duì)植物的影響。
（1）獲取PINI基因的mRNA后，通過(guò)RTPCR擴(kuò)增獲取PINI基因（DNA）時(shí)所需要的酶是 逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶。每次PCR循環(huán)分為3步，其中所需溫度最低的一步稱為 復(fù)性復(fù)性。
（2）PINI基因不能直接導(dǎo)入受體細(xì)胞，需要構(gòu)建PINI表達(dá)載體。構(gòu)建PINI表達(dá)載體的目的是 保證PINI在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和表達(dá)保證PINI在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和表達(dá)。
（3）為將PINI基因以正確方向插入質(zhì)粒需要雙酶切。在設(shè)計(jì)引物時(shí)，需在引物的5'端加入相應(yīng)的酶切位點(diǎn)。據(jù)圖1分析，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)選用的限制酶是 EcoRⅠ和PstⅠEcoRⅠ和PstⅠ。
（4）提取轉(zhuǎn)基因擬南芥的DNA，用相應(yīng)引物擴(kuò)增出35S啟動(dòng)子和PINI基因，為檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入擬南芥，應(yīng)電泳檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的 35S35S，不檢測(cè)另一種的原因是 啟動(dòng)子啟動(dòng)子。據(jù)圖2可知，也可在個(gè)體水平上進(jìn)行檢測(cè)，方法是 本實(shí)驗(yàn)的目的是要探究PINI過(guò)量表達(dá)對(duì)植物的影響，因此需要首先確定35S是否存在使用除草劑來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)除草劑的抗性本實(shí)驗(yàn)的目的是要探究PINI過(guò)量表達(dá)對(duì)植物的影響，因此需要首先確定35S是否存在使用除草劑來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)除草劑的抗性。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶和耐高溫的DNA聚合酶；復(fù)性；保證PINI在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和表達(dá)；EcoRⅠ和PstⅠ；35S；啟動(dòng)子；本實(shí)驗(yàn)的目的是要探究PINI過(guò)量表達(dá)對(duì)植物的影響，因此需要首先確定35S是否存在使用除草劑來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)除草劑的抗性
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/20 8:0:9組卷：7引用：2難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問(wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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