農桿菌Ti質粒上的T-DNA（序列已知）可以轉移并隨機插入被侵染植物的染色體DNA中。研究者將圖1中被侵染植物的DNA片段連接成環，并以此環為模板，利用PCR技術擴增出T-DNA插入位置兩側的未知序列，進一步分析可確定T-DNA插入的具體位置。T-DNA的序列如圖2所示，虛線處省略了部分核苷酸序列。已知SalⅠ酶的識別序列為5'G↓TCGAC3'。
（1）PCR技術擴增時起關鍵作用的酶是 Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶），其作用是 將游離的脫氧核苷酸連到引物的3'端將游離的脫氧核苷酸連到引物的3'端。
（2）擴增出T-DNA插入位置兩側的未知序列時，需要先根據 T-DNA基因兩端已知的堿基序列T-DNA基因兩端已知的堿基序列設計兩種特異性引物序列，利用圖中的引物 ①④①④組合可擴增出T-DNA兩側的未知序列。
（3）若只使用一種引物，通過PCR技術制備與T-DNA的b鏈相同的單鏈作為某些檢測的探針，則所選擇引物由5'→3'的前5個堿基序列為 5′-CTGTC-3′5′-CTGTC-3′。
（4）對PCR產物測序，經分析得到了圖1中的未知序列。下列DNA單鏈序列中（虛線處省略了部分核苷酸序列），可能正確的是 AA。
A．5'-TCGACCACG_____ATGTCGA-3'
B．5-AATTCCATG_____CTGAATT-3'
C．5'-GCAATGCGT_____TCGGGAA-3'
D．5'-TTGATACGC_____CGAGTAC-3'
（5）PCR技術擴增出T-DNA插入位置兩側的未知序列后，擴增產物可用 瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳技術進行鑒定。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）；將游離的脫氧核苷酸連到引物的3'端；T-DNA基因兩端已知的堿基序列；①④；5′-CTGTC-3′；A；瓊脂糖凝膠電泳
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：17引用：1難度：0.5
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2．科學家為了提高光合作用過程中Rubiaco酶對CO2的親和力，利用PCR定點突變技術改造Rubisco酶基因，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請回答下列問題：
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（2）PCR過程所依據的原理是。利用PCR技術擴增，若將一個目的基因復制10次，則需要在緩沖液中至少加入個引物。
（3）目的基因進入受體細胞內，并在受體細胞內維持穩定和表達的過程稱為。科研人員通過實驗研究發現培育的該轉基因植株的光合作用速率并未明顯增大，可能的原因是。
（4）另有一些科學家利用生物技術將人的生長激素基因導入小鼠受精卵的細胞核中，經培育獲得一種轉基因小鼠，其膀胱上皮細胞可以合成人的生長激素并分泌到尿液中。有關敘述錯誤的是。
A．選擇受精卵作為外源基因的受體細胞是因為這種細胞的全能性最容易表達
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