長期高血糖可引發血管細胞衰老。科研人員為研究S蛋白在因高血糖引發的血管細胞衰老中的作用，以腺病毒為載體將編碼S蛋白的S基因導入血管細胞，實現S蛋白在血管細胞中的大量表達。腺病毒的遺傳物質為DNA，其復制需要E1、E2、E3.基因共同完成。為將S基因導入腺病毒，科研人員首先構建了含S基因的重組質粒，過程如圖1所示。
（1）科研人員將S基因用BamHⅠ和 EcoRⅠBamHⅠ和 EcoRⅠ限制酶切割后，用DNA連接酶連入質粒Ⅰ，得到重組質粒Ⅰ（圖1甲所示），導入用CaCl2處理制備的感受態感受態細菌。用添加抗生紫的培養基篩選，對所長出的單菌落提取質粒，通過的方法可鑒定重組質粒Ⅰ是否插入了S基因。
（2）用PmeI酶切重組質粒Ⅰ獲得DNA片段。將此DNA片段與質粒Ⅱ（圖1乙所示）共同轉化為重組質粒Ⅱ（圖1丙所示）。使用添加的卡那霉素卡那霉素的培養基可篩選得到成功導入重組質粒Ⅱ的菌落。
（3）將含S基因的重組質粒Ⅱ，用PacI酶切后，獲得改造后的腺病毒DNA。將其導入A細胞（A細胞含有E3基因，可表達E3蛋白），如圖2所示。腺病毒DNA在A細胞內能夠復制并指導腺病毒外殼蛋白的合成復制并指導腺病毒外殼蛋白的合成，從而產生大量重組腺病毒，腺病毒進入宿主細胞后不整合到宿主細胞染色體上。用酶切時不能破壞啟動子，原因是啟動子是RNA 聚合酶RNA 聚合酶識別和結合的部位，有了它才能驅動基因轉錄出mRNA。
（4）綜合上述信息，從生物安全性角度分析重組腺病毒載體的優點：重組腺病毒只能在A細胞中才能夠復制，即使侵染其他細胞，也不能復制；重組腺病毒進入宿主細胞后不整合到宿主細胞染色體上；腺病毒是人工改造的載體，不含致病基因重組腺病毒只能在A細胞中才能夠復制，即使侵染其他細胞，也不能復制；重組腺病毒進入宿主細胞后不整合到宿主細胞染色體上；腺病毒是人工改造的載體，不含致病基因（寫出1點）。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】BamHⅠ和 EcoRⅠ；感受態；卡那霉素；復制并指導腺病毒外殼蛋白的合成；RNA 聚合酶；重組腺病毒只能在A細胞中才能夠復制，即使侵染其他細胞，也不能復制；重組腺病毒進入宿主細胞后不整合到宿主細胞染色體上；腺病毒是人工改造的載體，不含致病基因
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：16引用：2難度：0.7
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（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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