為生產具有特定性能的α-淀粉酶，研究人員從某種海洋細菌中克隆了α-淀粉酶基因（1656個堿基對），利用基因工程大量制備α-淀粉酶，實驗流程見右圖。請回答下列問題：
（1）利用PCR技術擴增α-淀粉酶基因前，需先獲得細菌的基因組DNA基因組DNA。
（2）為了便于擴增的DNA片段與表達載體連接，需在引物的5′5′端加上限制性酶切位點，且常在兩條引物上設計加入不同的限制性酶切位點，主要目的是使DNA片段能定向插入表達載體，減少自連。使DNA片段能定向插入表達載體，減少自連。。
（3）進行擴增時，反應的溫度和時間需根據具體情況進行設定，下列選項中②②的設定引物有關，⑥⑥的設定與擴增片段的長度有關。（填序號）
①變性溫度 ②退火溫度 ③延伸溫度 ④變性時間 ⑤退火時間 ⑥延伸時間
（4）下圖表示篩選獲得的工程菌中編碼α-淀粉酶的mRNA的部分堿基序列：
圖中虛線框內mRNA片段包含88個密碼子，如虛線框后的序列未知，預測虛線框后的第一個密碼子最多有1313種。
（5）獲得工程菌表達的α-淀粉酶后，為探究影響酶活性的因素，以濃度為1%的可溶性淀粉為底物測定酶活性，結果如下：
| 緩沖液 | 50mmol/L Na2HPO4-KH2PO4 | 50mmol/L Tris-HCl | 50mmol/L Gly-NaOH | |||||||||
| pH | 6.0 | 6.5 | 7.0 | 7.5 | 7.5 | 8.0 | 8.5 | 9.0 | 9.0 | 9.5 | 10.0 | 10.5 |
| 酶相對活性% | 25.4 | 40.2 | 49.8 | 63.2 | 70.1 | 95.5 | 99.5 | 85.3 | 68.1 | 63.7 | 41.5 | 20.8 |
pH為8.5，50mmol/LTris-HCl
pH為8.5，50mmol/LTris-HCl
。【考點】探究影響酶活性的條件．
【答案】基因組DNA；5′；使DNA片段能定向插入表達載體，減少自連。；②；⑥；8；13；pH為8.5，50mmol/LTris-HCl
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：348引用：3難度：0.3
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①圖1曲線中的酶促反應速率，可通過測量（指標）來體現。
②據圖1分析，板栗殼黃酮對胰脂肪酶活性具有作用。
（3）圖2中A顯示脂肪與胰脂肪酶活性部位結構互補時，胰脂肪酶才能發揮作用，因此酶的作用具有性。圖2中的B和C為板栗殼黃酮對胰脂肪酶作用的兩種推測的機理模式圖。結合圖1曲線分析，板栗殼黃酮的作用機理應為（選填“B”或“C”）。
（4）為研究不同pH條件下板栗殼黃酮對胰脂肪酶活性的影響，科研人員進行了相關實驗，結果如圖3所示
①本實驗的自變量有。
②由圖3可知，板栗殼黃酮對胰脂肪酶作用效率最高的pH值約為。加入板栗殼黃酮，胰脂肪酶的最適pH變。
③若要探究板栗殼黃酮對胰脂肪酶作用的最適溫度，實驗的基本思路是。發布：2024/12/31 2:0:1組卷：22引用：3難度：0.6