為生產具有特定性能的α-淀粉酶,研究人員從某種海洋細菌中克隆了α-淀粉酶基因(1656個堿基對),利用基因工程大量制備α-淀粉酶,實驗流程見右圖。請回答下列問題:

(1)利用PCR技術擴增α-淀粉酶基因前,需先獲得細菌的基因組DNA基因組DNA。
(2)為了便于擴增的DNA片段與表達載體連接,需在引物的5′5′端加上限制性酶切位點,且常在兩條引物上設計加入不同的限制性酶切位點,主要目的是使DNA片段能定向插入表達載體,減少自連。使DNA片段能定向插入表達載體,減少自連。。
(3)進行擴增時,反應的溫度和時間需根據具體情況進行設定,下列選項中②②的設定引物有關,⑥⑥的設定與擴增片段的長度有關。(填序號)
①變性溫度 ②退火溫度 ③延伸溫度 ④變性時間 ⑤退火時間 ⑥延伸時間
(4)下圖表示篩選獲得的工程菌中編碼α-淀粉酶的mRNA的部分堿基序列:

圖中虛線框內mRNA片段包含88個密碼子,如虛線框后的序列未知,預測虛線框后的第一個密碼子最多有1313種。
(5)獲得工程菌表達的α-淀粉酶后,為探究影響酶活性的因素,以濃度為1%的可溶性淀粉為底物測定酶活性,結果如下:
緩沖液 | 50mmol/L Na2HPO4-KH2PO4 | 50mmol/L Tris-HCl | 50mmol/L Gly-NaOH | |||||||||
pH | 6.0 | 6.5 | 7.0 | 7.5 | 7.5 | 8.0 | 8.5 | 9.0 | 9.0 | 9.5 | 10.0 | 10.5 |
酶相對活性% | 25.4 | 40.2 | 49.8 | 63.2 | 70.1 | 95.5 | 99.5 | 85.3 | 68.1 | 63.7 | 41.5 | 20.8 |
pH為8.5,50mmol/LTris-HCl
pH為8.5,50mmol/LTris-HCl
。【考點】探究影響酶活性的條件.
【答案】基因組DNA;5′;使DNA片段能定向插入表達載體,減少自連。;②;⑥;8;13;pH為8.5,50mmol/LTris-HCl
【解答】
【點評】
聲明:本試題解析著作權屬菁優網所有,未經書面同意,不得復制發布。
發布:2024/6/27 10:35:59組卷:348引用:3難度:0.3
相似題
-
1.小宇正在測試不同因素對酶活力的影響,控制實驗組1的pH為8,實驗組2的溫度為40℃,最后將實驗結果繪制成曲線圖(如圖)。以下能支持小宇實驗結果的曲線圖是( )
A. B. C. D. 發布:2024/12/31 2:30:2組卷:22引用:4難度:0.6 -
2.為了探究pH值和溫度對酶活性的影響,科學家進行了相關實驗,結果如圖所示。如圖表示的是pH值對植物和人的ATP水解酶活性的影響,右圖表示的是3種脫氫酶(A、B、C)的活性受溫度影響的情況。下列敘述正確的是( )
A.酶與ATP在元素組成上共有的元素是C、H、O、N、P B.據右圖分析,A、B酶的最適溫度分別是35℃、30℃,而C酶的最適溫度高于40℃ C.從左圖可知細胞由酸性變成堿性時的ATP水解酶活性逐漸升高 D.左圖中可以知道pH=7時植物ATP水解酶的活性最高 發布:2025/1/19 8:0:1組卷:20引用:1難度:0.7 -
3.胰脂肪酶是腸道內脂肪水解過程中的關鍵酶,板栗殼黃酮可調節胰脂肪酶活性進而影響人體對脂肪的吸收。為研究板栗殼黃酮對胰脂肪酶活性的影響,科研人員進行了下列實驗。
(1)胰脂肪酶可以通過
(2)為研究板栗殼黃酮的作用及機制,在酶量一定且環境適宜的條件下,科研人員檢測了加入板栗殼黃酮對胰脂肪酶酶促反應速率的影響,結果如圖1。
①圖1曲線中的酶促反應速率,可通過測量
②據圖1分析,板栗殼黃酮對胰脂肪酶活性具有
(3)圖2中A顯示脂肪與胰脂肪酶活性部位結構互補時,胰脂肪酶才能發揮作用,因此酶的作用具有
(4)為研究不同pH條件下板栗殼黃酮對胰脂肪酶活性的影響,科研人員進行了相關實驗,結果如圖3所示
①本實驗的自變量有
②由圖3可知,板栗殼黃酮對胰脂肪酶作用效率最高的pH值約為
③若要探究板栗殼黃酮對胰脂肪酶作用的最適溫度,實驗的基本思路是發布:2024/12/31 2:0:1組卷:22引用:3難度:0.6