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          為生產具有特定性能的α-淀粉酶,研究人員從某種海洋細菌中克隆了α-淀粉酶基因(1656個堿基對),利用基因工程大量制備α-淀粉酶,實驗流程見右圖。請回答下列問題:

          (1)利用PCR技術擴增α-淀粉酶基因前,需先獲得細菌的
          基因組DNA
          基因組DNA

          (2)為了便于擴增的DNA片段與表達載體連接,需在引物的
          5′
          5′
          端加上限制性酶切位點,且常在兩條引物上設計加入不同的限制性酶切位點,主要目的是
          使DNA片段能定向插入表達載體,減少自連。
          使DNA片段能定向插入表達載體,減少自連。

          (3)進行擴增時,反應的溫度和時間需根據具體情況進行設定,下列選項中
          的設定引物有關,
          的設定與擴增片段的長度有關。(填序號)
           ①變性溫度 ②退火溫度  ③延伸溫度 ④變性時間 ⑤退火時間  ⑥延伸時間
           (4)下圖表示篩選獲得的工程菌中編碼α-淀粉酶的mRNA的部分堿基序列:

          圖中虛線框內mRNA片段包含
          8
          8
          個密碼子,如虛線框后的序列未知,預測虛線框后的第一個密碼子最多有
          13
          13
          種。
          (5)獲得工程菌表達的α-淀粉酶后,為探究影響酶活性的因素,以濃度為1%的可溶性淀粉為底物測定酶活性,結果如下:
          緩沖液 50mmol/L Na2HPO4-KH2PO4 50mmol/L Tris-HCl 50mmol/L Gly-NaOH
          pH 6.0 6.5 7.0 7.5 7.5 8.0 8.5 9.0 9.0 9.5 10.0 10.5
          酶相對活性% 25.4 40.2 49.8 63.2 70.1 95.5 99.5 85.3 68.1 63.7 41.5 20.8
          根據上述實驗結果,初步判斷該α-淀粉酶活性最高的條件為
          pH為8.5,50mmol/LTris-HCl
          pH為8.5,50mmol/LTris-HCl

          【答案】基因組DNA;5′;使DNA片段能定向插入表達載體,減少自連。;②;⑥;8;13;pH為8.5,50mmol/LTris-HCl
          【解答】
          【點評】
          聲明:本試題解析著作權屬菁優網所有,未經書面同意,不得復制發布。
          發布:2024/6/27 10:35:59組卷:348引用:3難度:0.3
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            發布:2024/12/31 2:30:2組卷:22引用:4難度:0.6
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            (1)胰脂肪酶可以通過
             
            作用將食物中的脂肪水解為甘油和脂肪酸。
            (2)為研究板栗殼黃酮的作用及機制,在酶量一定且環境適宜的條件下,科研人員檢測了加入板栗殼黃酮對胰脂肪酶酶促反應速率的影響,結果如圖1。
            ①圖1曲線中的酶促反應速率,可通過測量
             
            (指標)來體現。
            ②據圖1分析,板栗殼黃酮對胰脂肪酶活性具有
             
            作用。
            (3)圖2中A顯示脂肪與胰脂肪酶活性部位結構互補時,胰脂肪酶才能發揮作用,因此酶的作用具有
             
            性。圖2中的B和C為板栗殼黃酮對胰脂肪酶作用的兩種推測的機理模式圖。結合圖1曲線分析,板栗殼黃酮的作用機理應為
             
            (選填“B”或“C”)。
            (4)為研究不同pH條件下板栗殼黃酮對胰脂肪酶活性的影響,科研人員進行了相關實驗,結果如圖3所示
            ①本實驗的自變量有
             

            ②由圖3可知,板栗殼黃酮對胰脂肪酶作用效率最高的pH值約為
             
            。加入板栗殼黃酮,胰脂肪酶的最適pH變
             

            ③若要探究板栗殼黃酮對胰脂肪酶作用的最適溫度,實驗的基本思路是
             

            發布:2024/12/31 2:0:1組卷:22引用:3難度:0.6
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