圖甲為構(gòu)建重組質(zhì)粒過(guò)程中的三種備選質(zhì)粒，其中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因。圖乙為培育轉(zhuǎn)AFPs基因（抗凍基因）番茄的示意圖，外源DNA和質(zhì)粒上均標(biāo)出了酶切位點(diǎn)及相關(guān)抗性基因。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
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（1）圖甲中通常選用質(zhì)粒C構(gòu)建重組質(zhì)粒，不選用質(zhì)粒A和B的原因分別是 質(zhì)粒A中沒(méi)有標(biāo)記基因質(zhì)粒A中沒(méi)有標(biāo)記基因、質(zhì)粒B的復(fù)制原點(diǎn)中含有HindⅢ酶切位點(diǎn)，如選用HindⅢ酶作為限制酶，會(huì)破壞復(fù)制原點(diǎn)質(zhì)粒B的復(fù)制原點(diǎn)中含有HindⅢ酶切位點(diǎn)，如選用HindⅢ酶作為限制酶，會(huì)破壞復(fù)制原點(diǎn)。
（2）據(jù)圖乙分析，若成功構(gòu)建重組質(zhì)粒以利于篩選鑒定，應(yīng)優(yōu)先選用兩種限制酶 BamHⅠ、HindⅢBamHⅠ、HindⅢ切割目的基因和質(zhì)粒，采用兩種限制酶的優(yōu)點(diǎn)是 保證目的基因與質(zhì)粒定向連接保證目的基因與質(zhì)粒定向連接。農(nóng)桿菌中的Ti-質(zhì)粒應(yīng)含有T-DNA，其作用是 攜帶目的基因進(jìn)入番茄細(xì)胞并整合到番茄細(xì)胞的染色體DNA攜帶目的基因進(jìn)入番茄細(xì)胞并整合到番茄細(xì)胞的染色體DNA。在構(gòu)建基因表達(dá)載體過(guò)程中常把兩個(gè)啟動(dòng)子串聯(lián)在一起形成雙啟動(dòng)子，加在目的基因上游，雙啟動(dòng)子的作用可能是 保證目的基因的高效轉(zhuǎn)錄（高效表達(dá)）保證目的基因的高效轉(zhuǎn)錄（高效表達(dá)）。
（3）圖丙中的A鏈和B鏈來(lái)自于AFPs基因。欲利用PCR技術(shù)對(duì)AFPs基因進(jìn)行擴(kuò)增，需要添加 TaqTaq酶，應(yīng)選取的引物是 引物2、引物3引物2、引物3，循環(huán)4次需要的引物數(shù)量是 3030個(gè)。
（4）為使改造后的AFPs基因能夠表達(dá)，人工設(shè)計(jì)質(zhì)粒D并對(duì)它的多個(gè)酶切位點(diǎn)進(jìn)行研究。若用HindⅢ酶或KpnⅠ酶單獨(dú)切割質(zhì)粒D，均獲得一條長(zhǎng)鏈，若用HindⅢ酶和EcoRⅠ酶同時(shí)切割，則獲得2個(gè)500bp和1個(gè)2666bp片段，若用KpnⅠ酶和EcoRⅠ酶同時(shí)切割，則獲得2個(gè)250bp和1個(gè)3166bp片段。若以HindⅢ酶切割位點(diǎn)為計(jì)算起點(diǎn)，則KpnⅠ酶切割位點(diǎn)與HindⅢ酶切割位點(diǎn)最短長(zhǎng)度為 750bp750bp，EcoRⅠ酶的兩個(gè)切割位點(diǎn)與HindⅢ切割位點(diǎn)的最短距離為 500bp500bp。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】質(zhì)粒A中沒(méi)有標(biāo)記基因；質(zhì)粒B的復(fù)制原點(diǎn)中含有HindⅢ酶切位點(diǎn)，如選用HindⅢ酶作為限制酶，會(huì)破壞復(fù)制原點(diǎn)；BamHⅠ、HindⅢ；保證目的基因與質(zhì)粒定向連接；攜帶目的基因進(jìn)入番茄細(xì)胞并整合到番茄細(xì)胞的染色體DNA；保證目的基因的高效轉(zhuǎn)錄（高效表達(dá)）；Taq；引物2、引物3；30；750bp；500bp
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/10 8:0:9組卷：5引用：2難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。回答下列問(wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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