H1是耐鹽細菌菌株，pDT3是插入了甲基對硫磷分解酶基因（mpd基因）的重組質粒。實驗小組將pDT3重組質粒轉移到H1菌株中，培育能降解甲基對硫磷的耐鹽工程菌。已知甲基對硫磷是高毒廣譜的殺蟲劑，分解后能產生黃色物質。回答下列問題：
（1）實驗室中，常用PCR擴增獲得mpd基因，其原理是 DNA半保留復制DNA半保留復制。如圖是mpd基因結構的示意圖，其中A～F是引物。為了保證mpd基因在受體細胞中高度表達，在擴增mpd基因時，應該選擇的圖中的兩種引物是 C、DC、D（填字母），原因是 DNA聚合酶只能從引物的3'端連接脫氧核苷酸DNA聚合酶只能從引物的3'端連接脫氧核苷酸和 擴增強啟動子能增強mpd基因的表達擴增強啟動子能增強mpd基因的表達。
（2）將pDT3重組質粒導入H1細菌細胞時，一般先用 Ca2+Ca2+處理受體細胞，以便細胞吸收外源DNA。轉化成功后，可用 抗體—抗原雜交抗體—抗原雜交的方法檢測受體細胞內是否表達出了甲基對硫磷分解酶。
（3）試設計實驗證明，獲得的轉基因工程菌能降解甲基對硫磷，且保留了耐鹽能力。
簡要寫出實驗思路：
①將轉基因工程菌株接種到含甲基對硫磷和一定濃度NaCl的培養基上將轉基因工程菌株接種到含甲基對硫磷和一定濃度NaCl的培養基上；
②培養后觀察到菌落周圍出現黃色圈培養后觀察到菌落周圍出現黃色圈。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA半保留復制；C、D；DNA聚合酶只能從引物的3'端連接脫氧核苷酸；擴增強啟動子能增強mpd基因的表達；Ca2+；抗體—抗原雜交；將轉基因工程菌株接種到含甲基對硫磷和一定濃度NaCl的培養基上；培養后觀察到菌落周圍出現黃色圈
【解答】
【點評】
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發布：2024/7/8 8:0:10組卷：13引用：2難度：0.6
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發布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6