如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，簡捷地分析出圖中片段F已知序列兩側的未知序列，具體流程如圖（以EoRI酶切為例），請據圖回答下列問題：
請據圖回答問題：
（1）步驟I用的EcoR I是一種 限制性核酸內切（或限制）限制性核酸內切（或限制）酶，它通過識別 雙鏈DNA雙鏈DNA（填“雙鏈DNA”或“RNA”）分子的特定的核苷酸序列，并且在特定位點進行切割。
（2）步驟Ⅱ連接，用的DNA連接酶催化相鄰核苷酸之間的3′一羥基與5′—磷酸基團間形成 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵鍵；PCR循環中，升溫到90℃以上是為了獲得DNA單鏈，復性后延伸，延伸時TaqDNA聚合酶的作用是催化 脫氧核苷酸之間形成磷酸二酯鍵脫氧核苷酸之間形成磷酸二酯鍵。
（3）若下表所列為已知的DNA序列和設計的一些PCR引物，步驟Ⅲ擴增，選用的PCR引物必須是 ②④②④（從引物①②③④中選擇，填編號）。
| 已知序列 | DNA序列（虛線處省略了部分核酸序列） |
| PCR引物 | ①5′-AACTATGCGCTCATGA-3′ ②5′-GCAATGCGTAGCCTCT-3′ ③5′-AGAGGCTACGCATTGC-3′ ④5′-TCATGAGCGCATAGTT-3′ |
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】限制性核酸內切（或限制）；雙鏈DNA；磷酸二酯鍵；脫氧核苷酸之間形成磷酸二酯鍵；②④
【解答】
【點評】
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