土壤鹽漬化影響水稻生長發育。科研人員將水稻耐鹽基因0sMYB56導入不耐鹽堿水稻品種吉粳88中，培育出了4株耐鹽堿水稻新品種。其操作流程及相關限制酶識別序列和切割位點如圖1，圖中I～Ⅲ為限制酶的酶切位點，bar為抗除草劑基因，Kan為卡那霉素抗性基因。請回答下列問題：
?
| 限制酶 | EcoRⅠ | BamHⅠ | HindⅢ | SacI |
| 識別序列和切制位點 | GAATTC | G'GATCC | A'AGCTT | GAGCT'C |
解旋
解旋
酶的作用。（2）進行PCR擴增時，反應的溫度和時間需根據具體情況進行設定，下列選項中
C
C
（填字母）的設定與引物有關，F
F
（填字母）的設定與擴增片段的長度有關。A．變性溫度B．變性時間C．復性溫度D．復性時間E．延伸溫度F．延伸時間
（3）過程①所用的一對引物如下，則過程②使用的限制酶是
BamHI
BamHI
和 SacI
SacI
。5'-CGCGGATCCATGAGAAAGGGCCCGTGG-3'
5'-CGAGCTCCTATCCCCAGAGAGGTAGCGA-3'
（4）科研人員采用特定的方法大量提取成功轉化的4株植株葉片的基因組DNA（目的基因中不含AAGCTT序列），用HindⅢ全酶切，將產物經電泳、轉膜后與目的基因的探針雜交，其雜交帶結果如圖2所示（圖中數字標號代表轉化成功的植株）。下列分析正確的有
ABC
ABC
（填字母）。A．雜交帶位置不同說明經HindⅢ酶切后形成的DNA片段長度不同
B．還有不含目的基因的DNA條帶在圖中沒有顯示
C．目的基因插入到受體細胞核DNA的位置和數量都是隨機的
D．相同位置上雜交帶對應DNA片段的脫氧核苷酸序列相同
（5）花椰菜病毒啟動子位于基因的上游，緊挨轉錄的起始位點，是
RNA聚合酶識別
RNA聚合酶識別
的部位，本研究中設計兩個相同啟動子分別連接bar和目的基因，其目的是 結合依據bar表達推測目的基因同時表達
結合依據bar表達推測目的基因同時表達
。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】解旋；C；F；BamHI；SacI；ABC；RNA聚合酶識別；結合依據bar表達推測目的基因同時表達
【解答】
【點評】
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發布：2024/5/30 8:0:9組卷：3引用：2難度：0.5
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發布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6