酵母細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄需要轉(zhuǎn)錄因子，轉(zhuǎn)錄因子包括DNA結(jié)合功能域（DNA-BD）和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（DNA-AD），兩結(jié)構(gòu)域分開時不能激活轉(zhuǎn)錄。如果將待測蛋白質(zhì)X與DNA-BD融合，蛋白質(zhì)Y與DNA-AD融合，蛋白質(zhì)X和Y有相互作用時，兩結(jié)構(gòu)域能重新呈現(xiàn)完整轉(zhuǎn)錄因子活性，并可激活報告基因的轉(zhuǎn)錄，過程如圖1所示。已知報告基因LacZ表達(dá)的酶可以將無色化合物X-gal水解成藍(lán)色產(chǎn)物。研究人員為了驗(yàn)證蛋白質(zhì)X和Y是否具有相互作用，分別構(gòu)建不同的酵母表達(dá)載體（如圖2和圖3所示），其中Ampr為氨芐青霉素（抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的形成）抗性基因，HIS3和TRPⅠ分別為控制組氨酸和色氨酸合成的基因。請回答下列問題：
（1）研究小組采用了巢式PCR技術(shù)獲取蛋白質(zhì)X和Y基因的編碼區(qū)序列，技術(shù)原理是利用兩套PCR引物進(jìn)行兩輪PCR擴(kuò)增（如圖4所示），首先利用第一對引物（外引物）對目的基因所在DNA進(jìn)行15～30個循環(huán)的擴(kuò)增；第二輪擴(kuò)增以第一輪擴(kuò)增產(chǎn)物為模板，利用第二對引物（內(nèi)引物或巢式引物）進(jìn)行15～30個循環(huán)擴(kuò)增。相比于常規(guī)PCR獲得的產(chǎn)物而言，巢式PCR獲得的產(chǎn)物特異性 強(qiáng)強(qiáng)（“強(qiáng)”或“弱”），原因是 如果利用外引物擴(kuò)增產(chǎn)生了錯誤片段，再利用內(nèi)引物擴(kuò)增在錯誤片段上進(jìn)行引物配對并擴(kuò)增的概率低如果利用外引物擴(kuò)增產(chǎn)生了錯誤片段，再利用內(nèi)引物擴(kuò)增在錯誤片段上進(jìn)行引物配對并擴(kuò)增的概率低。
（2）研究人員的主要技術(shù)路線如表所示，請完善下表：
| 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/td> | 方法步驟要點(diǎn)（部分） |
| 獲取X和Y基因的編碼區(qū)序列 | 巢式PCR擴(kuò)增蛋白質(zhì)Y編碼區(qū)序列時需在兩個① 內(nèi) 內(nèi) （填寫“內(nèi)”、“外”或“內(nèi)和外”）引物的5?端分別添加序列②GAATTC 和 CTCGAG GAATTC 和 CTCGAG ；為驗(yàn)證目的基因在PCR擴(kuò)增時是否發(fā)生了基因突變，可對PCR產(chǎn)物進(jìn)行③DNA 測序（測序） DNA 測序（測序） 。 |
| pLexA-JL和pB42AD載體的構(gòu)建 | 用特定限制酶切割目的基因和載體并連接，連接產(chǎn)物導(dǎo)入大腸桿菌后擴(kuò)增；為確定質(zhì)粒構(gòu)建是否成功，需要抽提兩種質(zhì)粒并酶切， 電泳后觀察④ 是否出現(xiàn)預(yù)期大小的目標(biāo)條帶 是否出現(xiàn)預(yù)期大小的目標(biāo)條帶 。 |
| 轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞 | 將成功構(gòu)建的載體通過⑤ Ca2+處理（感受態(tài)細(xì)胞） Ca2+處理（感受態(tài)細(xì)胞） 法導(dǎo)入到營養(yǎng)缺陷型酵母菌中，培養(yǎng)基中需添加物質(zhì)有⑥def def （用下列字母填寫）。a.氨芐青霉素 b.色氨酸 c.亮氨酸 d.X-gal e.瓊脂 f.甲硫氨酸 |
| 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證 | 通過觀察培養(yǎng)基中⑦ 菌落的顏色（菌落是否呈現(xiàn)藍(lán)色） 菌落的顏色（菌落是否呈現(xiàn)藍(lán)色） 來驗(yàn)證蛋白質(zhì)X和Y是否具有相互作用。 |
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。A.在細(xì)胞體內(nèi)檢測抗原和抗體能否發(fā)生相互作用
B.判斷控制某一性狀的兩對基因是否能夠獨(dú)立遺傳
C.判斷RNA聚合酶與某啟動子的結(jié)合是否具有組織特異性
D.篩選宿主細(xì)胞上能與新冠病毒S刺突蛋白特異性結(jié)合的受體
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；遺傳信息的轉(zhuǎn)錄和翻譯．
【答案】強(qiáng)；如果利用外引物擴(kuò)增產(chǎn)生了錯誤片段，再利用內(nèi)引物擴(kuò)增在錯誤片段上進(jìn)行引物配對并擴(kuò)增的概率低；內(nèi)；GAATTC 和 CTCGAG；DNA 測序（測序）；是否出現(xiàn)預(yù)期大小的目標(biāo)條帶；Ca2+處理（感受態(tài)細(xì)胞）；def；菌落的顏色（菌落是否呈現(xiàn)藍(lán)色）；AD
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：29引用：1難度：0.6
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt src="http://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：7引用：2難度：0.6 -
2．科學(xué)家為了提高光合作用過程中Rubiaco酶對CO2的親和力，利用PCR定點(diǎn)突變技術(shù)改造Rubisco酶基因，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請回答下列問題：
（1）PCR定點(diǎn)突變技術(shù)屬于（填“基因工程”或“蛋白質(zhì)工程”）。可利用定點(diǎn)突變的DNA構(gòu)建基因表達(dá)載體，常用將基因表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞，還需用到植物細(xì)胞工程中的技術(shù)，才能最終獲得轉(zhuǎn)基因植物。
（2）PCR過程所依據(jù)的原理是。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增，若將一個目的基因復(fù)制10次，則需要在緩沖液中至少加入個引物。
（3）目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為?？蒲腥藛T通過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)培育的該轉(zhuǎn)基因植株的光合作用速率并未明顯增大，可能的原因是。
（4）另有一些科學(xué)家利用生物技術(shù)將人的生長激素基因?qū)胄∈笫芫训募?xì)胞核中，經(jīng)培育獲得一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長激素并分泌到尿液中。有關(guān)敘述錯誤的是。
A．選擇受精卵作為外源基因的受體細(xì)胞是因?yàn)檫@種細(xì)胞的全能性最容易表達(dá)
B．采用DNA分子雜交技術(shù)可檢測外源基因在小鼠細(xì)胞內(nèi)是否成功表達(dá)
C．人的生長激素基因能在小鼠細(xì)胞表達(dá)，說明遺傳密碼在不同種生物中可以通用
D．將轉(zhuǎn)基因小鼠體細(xì)胞進(jìn)行核移植（克隆），可以獲得多個具有外源基因的后代發(fā)布：2025/1/16 8:0:1組卷：14引用：2難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說法錯誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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