徑柳匙葉草是一種泌鹽植物。科研工作者將徑柳匙葉草液泡膜Na⁺/K⁺逆向轉運蛋白基因（TaNHX2基因）轉移到棉花細胞內，獲得了轉基因耐鹽棉花新品種。如圖1是獲取的含有目的基因的DNA片段，Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ為三種限制酶，圖中箭頭所指為三種限制酶的切點；如圖2是三種限制酶的識別序列與酶切位點示意圖；如圖3是土壤農桿菌中用于攜帶目的基因的Ti質粒結構示意圖。請分析回答問題：

（1）不能在徑柳匙葉草根尖分生區細胞中獲得TaNHX2基因的mRNA，其原因是

基因的選擇性表達（徑柳匙葉草根尖分生區細胞中TaNHX2基因不能表達）

基因的選擇性表達（徑柳匙葉草根尖分生區細胞中TaNHX2基因不能表達）

。
（2）若用BamHⅠ切割圖1所示的DNA片段，獲取目的基因，則需選用

Sau3AⅠ

Sau3AⅠ

切割圖3所示質粒，以便構建基因表達載體，請寫出兩個黏性末端連接后的堿基序列：

，該序列能不能被圖2中某種酶識別，如果能，請寫出酶的名稱：

Sau3AⅠ

Sau3AⅠ

。簡述該方案的缺陷是

出現目的基因和質粒的自我環化

出現目的基因和質粒的自我環化

。
（3）參考上問，故切割圖1所示DNA片段的最佳方案是選用

EcoRⅠ和BamHⅠ

EcoRⅠ和BamHⅠ

酶。圖1所示一個DNA片段被完全酶切后會產生

5

5

個DNA片段。
（4）圖3中，啟動子可以被

RNA聚合酶

RNA聚合酶

識別，終止子序列的基本單位是

脫氧核苷酸

脫氧核苷酸

。
（5）為了檢測技術成果，科研工作者在個體水平的檢測方法是

將轉基因棉花種植在鹽堿地，觀察其生長狀況

將轉基因棉花種植在鹽堿地，觀察其生長狀況

。
（6）若已知TaNHX2基因的兩端部分序列為：5′-AACTATGCGC……CGTAGCCTCT-3′，請寫出PCR擴增該基因時的兩個引物對應的局部序列（前5個堿基序列），并標明5′和3′端：

5'-AACTA-3'

5'-AACTA-3'

，

5'-AGAGG-3'

5'-AGAGG-3'

。