同源重組是指發生在兩個DNA分子的同源序列（DNA序列相同或近似）之間直接進行交換的一種重組形式。利用同源重組的方法可以將目的基因插入到表達載體上，如圖1所示。該操作可通過PCR技術在任一位點實現質粒的線性化，只要將目的基因兩端帶有與線性化質粒兩端同源的DNA序列，在重組酶的作用下即可實現質粒上的同源重組，被稱為體外重組。
（1）真核生物有性生殖過程中發生在 同源染色體非姐妹染色單體同源染色體非姐妹染色單體之間的基因重組，為體外同源重組提供了依據。圖中B過程采用PCR技術擴增目的基因時，需要的正向引物和反向引物的序列中都由 線性化質粒兩端同源的DNA序列和目的基因的部分序列線性化質粒兩端同源的DNA序列和目的基因的部分序列兩部分組成。
（2）通常采用雙酶切法構建目的基因表達載體的優點是 保障目的基因和線性質粒的正確連接（防止目的基因、線性質粒的自身環化及目的基因與線性質粒的反接）保障目的基因和線性質粒的正確連接（防止目的基因、線性質粒的自身環化及目的基因與線性質粒的反接）。與雙酶切法相比，同源重組法構建基因表達載體的突出優點是 在重組酶的作用下可以實現載體上任一點與目的基因的重組在重組酶的作用下可以實現載體上任一點與目的基因的重組。
（3）表達質粒線性化和目的基因擴增后電泳結果分別如圖2甲、乙所示，將獲得的目的基因與線性化質粒混合導入受體細胞中，不添加重組酶，該過程稱為體內重組。為檢測不同細胞的同源重組情況，一段時間后利用相應的引物對三個細胞（標號1、2、3）中DNA進行PCR擴增，電泳結果如圖2丙所示。根據電泳結果可說明 1號、2號細胞未實現同源重組，3號細胞實現了同源重組1號、2號細胞未實現同源重組，3號細胞實現了同源重組。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】同源染色體非姐妹染色單體；線性化質粒兩端同源的DNA序列和目的基因的部分序列；保障目的基因和線性質粒的正確連接（防止目的基因、線性質粒的自身環化及目的基因與線性質粒的反接）；在重組酶的作用下可以實現載體上任一點與目的基因的重組；1號、2號細胞未實現同源重組，3號細胞實現了同源重組
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：26引用：1難度：0.6
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