基因工程：
三氯生是一種抑菌物質(zhì)，可以替代抗生素用于基因工程中篩選含目的基因的受體細(xì)胞2021年某科研團(tuán)隊通過先篩選出一種對三氯生抵抗性較強的重組質(zhì)粒，再將可以受溫度調(diào)控的基因插入該質(zhì)粒上，構(gòu)建了溫度調(diào)控表達(dá)質(zhì)粒。

（1）圖1中步驟a是基因工程四個步驟之一，則步驟a為

將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞

將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞

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（2）已知fabV基因（pa和pp代表從不同菌中獲得）可以使大腸桿菌抵抗三氯生。在圖1中，fabV-pa基因和fabv-pp基因是

目的

目的

（目的/標(biāo)記）基因。
（3）為獲得一種增強大腸桿菌對三氯生的抵抗作用效果較好的重組質(zhì)粒，將含有不同質(zhì)粒的大腸桿
菌分別接種到含三氯生或者不含三氯生的培養(yǎng)基中。培養(yǎng)一段時間后，結(jié)果如圖2。
①設(shè)置pF₂組（無三氯生）和pF₂組（含三氯生）的原因是

D

D

。
A.驗證pF₂質(zhì)粒可以促進(jìn)大腸桿菌生長
B.驗證pF₂質(zhì)粒可以抑制大腸桿菌生長
C.驗證三氯生對含pF₂質(zhì)粒的大腸桿菌生長無影響
D.驗證三氯生可以抑制含pF₂質(zhì)粒的大腸桿菌生長
②結(jié)合圖2，說說哪種質(zhì)粒會被用于構(gòu)建溫度調(diào)控表達(dá)，并說明理由

pFpa組。在相同培養(yǎng)時間下，pFpa組大腸桿菌對三氯生的抵抗作用效果較好

pFpa組。在相同培養(yǎng)時間下，pFpa組大腸桿菌對三氯生的抵抗作用效果較好

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（4）科學(xué)家對上述選出質(zhì)粒進(jìn)行改造，獲得了如圖3所示質(zhì)粒。其中P₁和P₂是啟動子，可以啟動轉(zhuǎn)錄；c基因在低溫下會抑制P₁；R基因在高溫下會抑制P₂；T₁和T₂是終止子，可以終止轉(zhuǎn)錄。
①如果將lacZ基因和GFP基因插入圖3質(zhì)粒中，使得最后表現(xiàn)為低溫下只表達(dá)GFP蛋白，而高溫下只表達(dá)lacZ蛋白。則以下說法正確的有

BC

BC

（多選）。
A.GFP基因插在R基因和終止子T₁之間
B.lacZ基因插在R基因和終止子T₁之間
C.GFP基因插在啟動子P₂和終止子T₂之間
D.lacZ基因插在啟動子P₂和終止子T₂之間
②如果僅將GFP（綠色熒光蛋白）基因插入圖3質(zhì)粒，構(gòu)建成一個新的重組質(zhì)粒。利用該重組質(zhì)粒進(jìn)行基因工程，受體細(xì)胞為大腸桿菌。那么，在篩選含有目的基因的受體細(xì)胞時，如何判斷是否成功？（不考慮溫度因素）

發(fā)綠色熒光的大腸桿菌為含有目的基因的個體

發(fā)綠色熒光的大腸桿菌為含有目的基因的個體

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