基因工程在農牧業、食品業和醫藥等方面展示出廣闊應用前景
（1）構建小鼠乳腺生物反應器批量生產人胰島素，通過 逆轉錄逆轉錄獲得cDNA，再PCR后獲得人胰島素基因。在PCR過程中溫度先上升到90℃以上，后降低到50℃其目的分別是 高溫使模板雙鏈DNA解旋為單鏈高溫使模板雙鏈DNA解旋為單鏈、促進引物與單鏈DNA相應互補序列結合促進引物與單鏈DNA相應互補序列結合。一條單鏈cDNA在PCR儀中進行n次循環，需要消耗 2n-12n-1個引物。構建的表達載體導入的受體細胞是 受精卵受精卵。
（2）若受體細胞是大腸桿菌，常用Ca2+處理大腸桿菌，使其處于感受態，有利于 吸收周圍環境中的DNA吸收周圍環境中的DNA。理論上用大腸桿菌作為“工程菌株”制備的胰島素缺乏生物活性，從細胞結構功能的角度分析，原因是 大腸桿菌是原核生物，沒有內質網、高爾基體，無法對蛋白質加工分泌到細胞外大腸桿菌是原核生物，沒有內質網、高爾基體，無法對蛋白質加工分泌到細胞外。
（3）人肺特異性x蛋白（LUNX）基因是某種肺癌診斷的標志物。為研究LUNX基因的增強子是否具有增強基因表達的功能，及其發揮作用的位置是位于啟動子的上游還是下游。科研人員利用PCR技術擴增了3種LUNX基因增強子片段（用E1～E3表示）分別定向連接到pGL3載體中熒光素酶報告基因（luc+）、SV40啟動子的上游和下游，如圖1和圖2所示。通過相關技術檢測熒光素酶的活性，從而對增強子的功能進行判斷，luc+的表達強度越強，熒光素酶的活性越高。
①以上LUNX基因增強子片段經回收純化測序正確后，將雙酶切后的PCR產物分別定向連接到用 KpnI和XhoIKpnI和XhoI雙酶切和 BamHI和SalIBamHI和SalI雙酶切的pGL3載體中，構建LUNX基因增強子分別位于報告基因上游和下游的載體。
②利用相關技術對熒光素酶的活性進行檢測，結果如圖3，能得出結論 增強子E1、E2、E3在下游都能增強表達，其中E1效果最為顯著。E3在啟動子的上游下游都能增強表達增強子E1、E2、E3在下游都能增強表達，其中E1效果最為顯著。E3在啟動子的上游下游都能增強表達。
【答案】逆轉錄；高溫使模板雙鏈DNA解旋為單鏈；促進引物與單鏈DNA相應互補序列結合；2n-1；受精卵；吸收周圍環境中的DNA；大腸桿菌是原核生物，沒有內質網、高爾基體，無法對蛋白質加工分泌到細胞外；KpnI和XhoI；BamHI和SalI；增強子E1、E2、E3在下游都能增強表達，其中E1效果最為顯著。E3在啟動子的上游下游都能增強表達
【解答】
【點評】
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發布：2024/7/25 8:0:9組卷：11引用：2難度：0.6
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1．人類基因組計劃測定了人體的24條染色體，這24條染色體是（ ）
發布：2024/12/31 0:30:1組卷：115引用：7難度：0.7 -
2．學習以下材料，回答（1）～（4）題。
利用抑制性tRNA進行無義突變遺傳病的治療
無義突變是由于某個堿基的改變使代表某種氨基酸的密碼子突變為終止密碼子（UAA、UAG或UGA），從而使肽鏈合成提前終止，造成蛋白質的功能改變，引發相關疾病。約有10%～15%的人類基因相關遺傳疾病是由無義突變引發的。常規的基因治療是將正常基因的cDNA序列或是有治療價值的基因（如CRISPR-Cas9相關的基因編輯工具）通過一定的方式導入人體靶細胞內，達到替代或修復缺陷基因、治療疾病的目的。導入基因插入位置不當、過高或過低表達，都可能會導致副作用。盡管基因編輯可以實現生理水平的基因表達，但基因編輯工具引入外源蛋白可能引發強烈的免疫反應仍然是巨大的挑戰。
抑制性tRNA（sup-tRNA）由天然tRNA改造而來，它的反密碼子通過堿基配對原則可以識別無義突變的終止密碼子，使得mRNA在翻譯至無義突變位點時不啟動翻譯終止而是繼續向后進行翻譯，獲得有功能的全長蛋白。
I型黏多糖貯積癥的病因，是相關基因發生無義突變，產生終止密碼子UAG。研究者構建小鼠該突變基因mldua和Flag基因融合的載體（圖1），以及針對該無義突變設計的sup-tRNA表達載體（產生的sup-tRNA能夠識別UAG并攜帶酪氨酸Tyr,簡寫作sup-tRNATyr），將其導入細胞進行研究，發現與具有相似作用的化合物G418比較，sup--tRNA的作用更加顯著（圖2）；進一步利用重組腺相關病毒作為載體將sup-tRNA導入患病小鼠模型中，實驗顯示能夠降低黏多糖過度積存，實現對該病癥的有效治療，其療效可以持續半年以上。
從整體來看，G418在促進跨越無義突變位點繼續翻譯時引入的氨基酸較為隨機，而sup-tRNA引入的氨基酸較為單一，且不會影響內源tRNA穩態，所以sup-tRNA在個體治療中具有很高的安全性，因而在未來基因突變引起的疾病相關治療中具有非常大的應用前景。
（1）侵染時，作為載體的重組腺相關病毒與靶細胞膜上的發生識別，引發內吞，進入細胞后釋放單鏈DNA作為模板，利用宿主細胞的催化合成其互補DNA鏈，再經過過程產生sup-tRNA。
（2）除了引入的氨基酸較為單一，不影響內源tRNA穩態，我們還可推斷，用于治療的sup-tRNA在正常終止密碼子處（填“能”或“不能”）繼續往后翻譯，具有很高的安全性。
（3）研究者構建mldua突變基因和Flag基因融合的載體，目的是通過檢測來確定是否跨越無義突變位點繼續向后翻譯。實驗結果表明，相比于化合物G418，sup-tRNA在促進無義突變位點的翻譯方面更加有效，支持這一結論的依據是：。
（4）有文獻報道，已在近1000個不同的人類基因中發現了7500多個無義突變。常規的基因治療需要為每種疾病設計獨特的治療策略，這將是一項耗費驚人的項目。據此說明sup-tRNA的應用價值。發布：2025/1/3 8:0:1組卷：28引用：1難度：0.6 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，自然界有些植物能產生幾丁質酶催化幾丁質水解從而抵抗真菌感染。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入沒有抗性的植物體內，可增強其抗真菌的能力。如圖表示為獲取幾丁質酶基因而建立cDNA文庫的過程。
（1）圖示以mRNA為材料通過法獲得cDNA，該方法依據的原理是，通過這種方法獲得的基因中因缺乏和結構，導致將其直接導入受體細胞中不能復制和表達。
（2）與選用老葉相比，選用嫩葉更容易提取到mRNA，原因是，且提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（3）將從cDNA文庫中獲得的幾丁質酶基因和質粒載體用酶和DNA連接處理后連接起來，構建基因表達載體，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：5引用：1難度：0.7