二十碳五烯酸（EPA）能促進體內飽和脂肪酸代謝，是人體自身不能直接合成但又不可缺少的營養物質。獲取EPA產品的主要途徑是從魚油等海洋漁業資源中提取。研究人員利用轉基因技術從海洋細菌中提取了EPA合成途徑的關鍵基因pfaB，并將其導入酵母菌內，通過酵母菌發酵生產EPA，相關過程如圖所示，請回答下列問題：
（1）利用PCR擴增pfaB基因前，需設計引物 ①④①④（填序號），在第 三三輪循環產物中開始出現兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段（pfaB基因）。
（2）利用PCR擴增pfaB基因時，需將溫度上升到90℃后再降溫至50℃，目的是使pfaB基因雙鏈解旋為單鏈后，便于 引物與模板鏈引物與模板鏈通過堿基互補配對原則結合。將pfaB基因連接在pP1C9質粒上時所用的酶是 DNA連接酶（和限制酶）DNA連接酶（和限制酶）。
（3）將pfaB-pP1C9表達載體導入酵母菌前，需先將表達載體導入大腸桿菌并進行篩選，篩選時培養基中應加入 氨芐青霉素氨芐青霉素，再將含有表達載體的大腸桿菌與酵母菌置于電轉杯中，通過電激將大腸桿菌導入酵母菌，使該表達載體進入酵母菌細胞中，且在酵母菌中不會隨著其繁殖而丟失的原因是，表達載體上含有 真核真核（填“真核”或“原核”）生物復制原點，能在酵母菌中復制。
【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】①④；三；引物與模板鏈；DNA連接酶（和限制酶）；氨芐青霉素；真核
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/28 8:51:19組卷：29引用：1難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
發布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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