心腦血管疾病引發的血栓并發癥嚴重威脅人類生命，居各種疾病死亡率首位。臨床上常用組織型纖溶酶原激活劑作為溶解血栓、搶救心肌梗死患者的特效藥。然而，t-PA因注射劑量大容易誘發顱內出血，為了提高t-PA臨床應用的可行性，科學家研發了一種顱內出血傾向大幅度降低的優質t-PA突變蛋白。據此回答下列問題：
（1）人t-PA由527個氨基酸構成（如下圖所示），基礎研究顯示，將t-PA第84位的半胱氨酸替換為絲氨酸，所形成的突變蛋白溶解血栓有效性明顯提高。對t-PA的改造必須通過 基因修飾（或基因合成）基因修飾（或基因合成）獲得t-PA突變基因而不是直接改造蛋白質。
（2）t-PA突變基因最終需要與P質粒重組才能構建基因表達載體。P質粒DNA分子上有①復制原點，可以保證B質粒在受體細胞中能 自我復制自我復制；②多個限制酶切位點，便于 目的基因（外源DNA）的插入目的基因（外源DNA）的插入；③標記基因和相關的啟動子。
（3）基因表達載體進入受體細胞中并在細胞內維持穩定和表達的過程稱為 轉化轉化。
（4）為檢測t-PA基因是否導入受體細胞，可采用 DNA分子雜交DNA分子雜交進行檢測。除此之外，還可以使用PCR技術，實驗組以待測樣本DNA為模板，使用引物1：5′-TACCAAGTGATCTGCAGA-3′、引物2：5’-TCGCATGTTGTGACGAAT-3’5’-TCGCATGTTGTGACGAAT-3’（填引物的核苷酸序列）進行PCR擴增；同時以 以t-PA突變基因片段為模板以t-PA突變基因片段為模板模板的組別作為陰性對照組。若 實驗組與陽性對照組的結果一致，且陰性對照組無擴增產物實驗組與陽性對照組的結果一致，且陰性對照組無擴增產物，說明目的基因導入成功。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】基因修飾（或基因合成）；自我復制；目的基因（外源DNA）的插入；轉化；DNA分子雜交；5’-TCGCATGTTGTGACGAAT-3’；以t-PA突變基因片段為模板；實驗組與陽性對照組的結果一致，且陰性對照組無擴增產物
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：6引用：1難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
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（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
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（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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