為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉運肽基因相連，導入油菜細胞并獲得了轉基因油菜品種．
（1）研究人員依據基因的已知序列設計引物，采用PCRPCR法從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉運肽基因．在上述引物設計時，分別在引物中加入如圖甲所示酶的識別序列，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，得到A、DA、D端（填圖中字母）相連的融合基因．
（2）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質粒的T-DNA中，構建表達載體表達載體并導入農桿菌中．將獲得的農桿菌接種在含四環素四環素的固體平板上培養得到單菌落，再利用液體液體培養基振蕩培養，可以得到用于轉化的侵染液．
（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞，進一步篩選后獲得轉基因油菜．
（4）提取上述轉基因油菜的mRNA，在逆轉錄逆轉錄酶的作用下獲得cDNA，再依據融合基因融合基因的DNA片段設計引物進行擴增，對擴增結果進行檢測，可判斷融合基因是否完成轉錄轉錄．
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】PCR；ClaⅠ限制酶和DNA連接；A、D；表達載體；四環素；液體；利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞；逆轉錄；融合基因；轉錄
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：70引用：8難度：0.3
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
發布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6