如圖是將乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg導入巴斯德畢赤酵母菌生產乙肝疫苗的過程示意圖。巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營養型酵母，能將甲醇作為其唯一碳源，此時AOX1基因受到誘導而表達，圖中pPIC9K質粒上5′AOX1和3′AOX1（TT）分別是基因AOX1的啟動子和終止子。該酵母菌體內無天然質粒，科學家改造出了圖1所示質粒用作載體，其與目的基因形成的重組質粒經酶切后可以與酵母菌染色體發生同源重組，將目的基因整合于染色體中以實現表達。請回答：
（1）用PCR技術擴增HBsAg基因時原料是 脫氧核苷酸（dNTP）脫氧核苷酸（dNTP），Taq酶需要 Mg2+Mg2+激活。
（2）為實現HBsAg基因和pPIC9K質粒重組，設計引物時需要在引物的 5’5’端添加相應限制酶的識別序列，則在HBsAg基因兩側的A和B位置添加的堿基序列分別是 TACGTATACGTA、CCTAGGCCTAGG，這樣設計的優點是 避免目的基因反向接入質粒（保證目的基因定向接入質粒）避免目的基因反向接入質粒（保證目的基因定向接入質粒）。
（3）酶切獲取HBsAg基因后，需用 T4DNA連接酶T4DNA連接酶（填“E.coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）將其連接到pPIC9K質粒上，形成重組質粒，構建重組質粒的目的是 讓目的基因在受體細胞中穩定存在和遺傳，并使目的基因能夠表達和發揮作用讓目的基因在受體細胞中穩定存在和遺傳，并使目的基因能夠表達和發揮作用。
（4）若用限制酶SnaBⅠ、BglⅡ聯合酶切pPIC9K質粒，獲得的DNA片段的長度分別是38kb、27kb、67kb；用限制酶BglⅡ、AvrⅡ聯合酶切pPIC9K質粒，得到的DNA片段的長度分別是38kb、40kb、54kb；已知HBsAg基因長度是55kb。步驟3中應選用限制酶 BglⅡBglⅡ來切割重組質粒以獲得重組DNA，切割后的重組DNA的長度是 136kb136kb。
（5）轉化的酵母菌在培養基上培養一段時間后，需要向其中加入甲醇，其目的是 誘導HBsAg基因表達誘導HBsAg基因表達。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】脫氧核苷酸（dNTP）；Mg2+；5’；TACGTA；CCTAGG；避免目的基因反向接入質粒（保證目的基因定向接入質粒）；T4DNA連接酶；讓目的基因在受體細胞中穩定存在和遺傳，并使目的基因能夠表達和發揮作用；BglⅡ；136kb；誘導HBsAg基因表達
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：2引用：2難度：0.6
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（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
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（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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