新冠病毒（+RNA）的刺突蛋白S通過與人體黏膜細胞表面的ACE2受體結合而進入細胞，是宿主抗體的重要作用位點。如圖1是科研人員利用新冠病毒的+RNA提取S蛋白基因和S蛋白受體結合域RBD基因作為抗原基因序列，研制新冠病毒雙抗原疫苗的技術路線。已知PCR1與PCR2要分別進行，然后將產物混合，使用引物1和引物4進行PCR3，最終獲得大量S-RBD融合基因（1500bp）。
（1）PCR3過程中，片段1與片段2連接形成S-RBD融合基因，需要使用 耐高溫的DNA聚合耐高溫的DNA聚合酶。為使S-RBD融合基因能與pX質粒相連接，并在工程菌中表達時先合成S蛋白，則PCR1過程中，應在引物1的5′端添加的限制酶序列是 5′CATATG3′5′CATATG3′。
（2）為初步檢測過程B構建是否成功，用EcoRⅠ、NdeⅠ、HindⅢ對重組pX系列質粒進行完全酶切，然后對重組pX系列質粒及其酶切產物進行凝膠電泳檢測，結果如圖2。據圖可知，重組質粒pX2和pX5構建成功的依據是 重組質粒pX2和pX5酶切后形成的1000bp和500bp片段堿基對總和等于S—RBD融合基因長度1500bp重組質粒pX2和pX5酶切后形成的1000bp和500bp片段堿基對總和等于S—RBD融合基因長度1500bp。
（3）在工程菌的篩選時，可先后用兩種抗生素進行影印培養實驗（即使用無菌的絨氈布壓在培養基A的菌落上，帶出少許菌種，平移并壓在培養基B上），在培養基B中存活的菌落是否含有目的基因 否否（填“是”或“否”）。鑒定重組pX質粒是否導入工程菌還可以采用的方法是 觀察菌落是否具有熒光觀察菌落是否具有熒光。
（4）試從免疫學角度分析此種雙抗原疫苗比常規S蛋白疫苗更具優勢的原因 此種雙抗原疫苗含有S蛋白受體結合域RBD，有利于進入靶細胞，從而激發細胞免疫此種雙抗原疫苗含有S蛋白受體結合域RBD，有利于進入靶細胞，從而激發細胞免疫。
【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】耐高溫的DNA聚合；5′CATATG3′；重組質粒pX2和pX5酶切后形成的1000bp和500bp片段堿基對總和等于S—RBD融合基因長度1500bp；否；觀察菌落是否具有熒光；此種雙抗原疫苗含有S蛋白受體結合域RBD，有利于進入靶細胞，從而激發細胞免疫
【解答】
【點評】
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發布：2024/10/26 12:30:1組卷：15引用：3難度：0.6
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