大豆凝集素（L）具有防御病害的功能，該蛋白存在于大豆種子的子葉中。研究人員嘗試利用蛋白L的特性構建抗病毒馬鈴薯，進行了以下實驗。
（1）從大豆抗病品種中獲取L基因，通過PCR的方法在基因兩側引入限制酶酶切位點，根據圖1中T-DNA的結構，引入適宜的酶切位點是 XbaⅠ和SmaⅠXbaⅠ和SmaⅠ。通過 農桿菌轉化農桿菌轉化法將酶切、連接產物導入馬鈴薯細胞，獲得多株轉基因抗病馬鈴薯。
（2）為研究轉基因馬鈴薯抗病毒植株的分子機理，研究人員利用Taqman探針和反轉錄PCR技術，對轉基因馬鈴薯多種防衛反應基因的表達進行檢測：
①提取抗病植株葉片細胞的 總mRNA總mRNA進行反轉錄，獲取cDNA．
②設計各種防衛基因的引物，利用圖2所示的原理進行PCR。Taqman探針的結構如圖所示，由于 探針有可以堿基互補配對的片段探針有可以堿基互補配對的片段，游離探針上的熒光素會與淬滅劑結合無法發出熒光。在PCR過程中，Taq酶體現出 5'→3'聚合酶與5'→3'外切酶5'→3'聚合酶與5'→3'外切酶兩種酶活性，在相同擴增時間中，總熒光值與 待測基因的mRNA（轉錄）量待測基因的mRNA（轉錄）量成正比。
③經檢測，轉基因馬鈴薯水楊酸（SA）信號通路相關蛋白基因表達量顯著上升，SA是一種植物抗病有關的調節物質。研究人員推測L儀器檢測通過激活SA途徑提升抗病能力，欲驗證這一假設，需要進行的實驗是 敲除SA受體基因或抑制SA信號途徑，檢測轉基因馬鈴薯的抗病情況敲除SA受體基因或抑制SA信號途徑，檢測轉基因馬鈴薯的抗病情況。
【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】XbaⅠ和SmaⅠ；農桿菌轉化；總mRNA；探針有可以堿基互補配對的片段；5'→3'聚合酶與5'→3'外切酶；待測基因的mRNA（轉錄）量；敲除SA受體基因或抑制SA信號途徑，檢測轉基因馬鈴薯的抗病情況
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：5引用：3難度：0.5
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