可用作生物表面活性劑的鼠李糖脂不僅具有優異的功能穩定性，還具有無毒、無污染、可被生物降解等優點，因而在醫藥、食品、農業、石油開采、環境污染修復等領域展示了其獨特的應用前景。可合成鼠李糖脂的天然菌株存在致病性等缺點，而異源菌株中往往存在合成鼠李糖脂的重要前體物質，理論上只要將外源基因插入該菌株進行異源表達即可合成鼠李糖脂。某科研團隊選擇在無致病的異源菌株惡臭假單胞菌（P.jye.ai）中插入外源基因rhIA以合成鼠李糖脂。已知表達載體pBBRmcs-5的MCS含有多種限制性核酸內切酶的單一切點，GmR為慶大霉素的抗性基因。請回答：
（1）利用PCR技術獲取外源基因rhIA：以下可提供外源基因rhIA模板的菌株有 ③④③④。
①P.jye.ai②E.coli③P.aeruginosa④Burkholderia sp
（2）因外源基因rhIA不含有MCS中的限制酶酶切位點，需對上述PCR產物進行二次PCR擴增。二次PCR所使用的引物應該在第一次PCR引物的 5′5′（填“3′”或“5′”）端插入包含限制酶酶切位點的序列。在上游引物所插入的序列含有5′AGGGCGAATTGGAGCTC3′，下游引物插入的序列含有5′GCTTGATATCGAATTCGA3′。
（3）基因表達載體構建：將表達載體pBBRmcs-5與上述擴增產物用SacⅠ和 EcoRⅠEcoRⅠ限制性核酸內切酶酶切后進行連接。
（4）將目的基因導入受體細胞：用 Ca2+（或CaCl?）Ca2+（或CaCl?）處理P.jye.ai使其處于能夠吸收外源DNA的生理狀態，與上述基因農達載體混合培養一段時間。
（5）目的基因的檢測與鑒定：
①用稀釋涂布法將培養液接種到含慶大霉素的 選擇選擇（填“選擇”或“鑒別”）培養基上培養以檢測表達載體是否導入重組菌株。
②通過PCR技術可檢測 abab。
a.表達載體pBBRmcs-5是否含有外源基因rhIA
b.外源基因rhIA是否轉錄出mRNA
c.外源基因rhIA是否表達出相應的蛋白質
③測定發酵液中 鼠李糖脂鼠李糖脂的含量。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】③④；5′；EcoRⅠ；Ca2+（或CaCl?）；選擇；ab；鼠李糖脂
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：19引用：1難度：0.6
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