酯酶結(jié)合熒光分析法可對有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥進(jìn)行檢測，某研究院利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得一種催化效率高、農(nóng)藥敏感性強(qiáng)的微生物酯酶。
（1）人工合成酯酶基因后通過PCR技術(shù)可實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增，為該過程提供能量的是 dNTPdNTP；還需要設(shè)計兩種引物，設(shè)計引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的 3′端3′端開始連接脫氧核苷酸。為方便構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要在引物的5′端設(shè)計 限制（性內(nèi)切核酸）限制（性內(nèi)切核酸）酶的識別序列。某質(zhì)粒圖譜和目的基因的序列如圖所示，應(yīng)選擇引物 ①③①③（填數(shù)字）。（①-④中加粗表示識別序列前的保護(hù)堿基，增強(qiáng)上述酶與目的基因的結(jié)合。）
①5′-CCGGAATTCATGCTTGATATGCCAATC-3′
②5′-CCCAAGCTTTACGAACTATACGGTTAG-3′
③5′-CCCAAGCTTCTAGTCGAACACAAGAAG-3′
④5′-CCGGAATTCGATCAGCTTGTGTTCTTC-3′
（2）若提取高產(chǎn)酯酶野生菌的基因組DNA，用設(shè)計的引物和合適的條件進(jìn)行PCR，其產(chǎn)物可用 瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)有目的基因以外的雜帶存在，分析可能原因是：在基因組DNA中有其他引物結(jié)合的位點(diǎn)/引物特異性不強(qiáng)/引物過短在基因組DNA中有其他引物結(jié)合的位點(diǎn)/引物特異性不強(qiáng)/引物過短。
解決措施：在目的基因的 上、下游上、下游（填“內(nèi)部”或“上、下游”）重新設(shè)計引物進(jìn)行PCR。
（3）將PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒用限制酶酶切，酶切產(chǎn)物純化后，用DNA連接酶連接，這一操作的目的是 讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】dNTP；3′端；限制（性內(nèi)切核酸）；①③；瓊脂糖凝膠電泳；在基因組DNA中有其他引物結(jié)合的位點(diǎn)/引物特異性不強(qiáng)/引物過短；上、下游；讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：6引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6