已知組成型啟動(dòng)子可以高效地啟動(dòng)目的基因在植物各種組織中的表達(dá)，但常會(huì)阻礙植物的生長(zhǎng)發(fā)育。誘導(dǎo)型啟動(dòng)子可在特定環(huán)境條件下誘導(dǎo)目的基因的表達(dá)。沙冬青脫水素基因（AmDHN基因）能使植株具有較強(qiáng)的抗旱作用?？蒲腥藛T通過(guò)構(gòu)建AmDHN基因表達(dá)載體，以培育耐旱苜蓿新品種，所用載體如圖1所示，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）用載體1構(gòu)建含AmDHN目的基因的表達(dá)載體，可以成功轉(zhuǎn)化苜蓿，但會(huì)出現(xiàn)抑制抗性芽生長(zhǎng)和抗性植株生根的現(xiàn)象，推測(cè)³³S啟動(dòng)子屬于

組成型

組成型

啟動(dòng)子。
（2）圖2是科研人員擴(kuò)增Rd29A啟動(dòng)子所設(shè)計(jì)的引物，根據(jù)引物的堿基序列及限制酶的識(shí)別序列分析，構(gòu)建載體2時(shí)選用的限制酶是

SacⅠ和SmaⅠ

SacⅠ和SmaⅠ

。為了改造載體1中的啟動(dòng)子，需要用

BclⅠ和SacⅠ

BclⅠ和SacⅠ

酶切割載體1、2為最佳。
（3）構(gòu)建Rd29A啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)AmDHN基因的表達(dá)載體后，先將其導(dǎo)入

農(nóng)桿菌

農(nóng)桿菌

，再轉(zhuǎn)化苜蓿。轉(zhuǎn)化后應(yīng)在培養(yǎng)基中添加

新霉素

新霉素

進(jìn)行篩選。
（4）為檢測(cè)轉(zhuǎn)基因苜蓿中AmDHN基因的表達(dá)水平，科研人員做了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。下表呈現(xiàn)了部分操作步驟，請(qǐng)完成表格：

實(shí)驗(yàn)步驟的目的	簡(jiǎn)要操作過(guò)程
① 使幼苗適應(yīng)外界的自然環(huán)境（進(jìn)行煉苗） 使幼苗適應(yīng)外界的自然環(huán)境（進(jìn)行煉苗）	在轉(zhuǎn)基因無(wú)菌苗根系長(zhǎng)至2-3 cm時(shí)，將培養(yǎng)無(wú)菌苗三角瓶的封口膜打開(kāi)，培養(yǎng)一周，觀察其生長(zhǎng)狀況
提供適宜生長(zhǎng)條件	將甲組幼苗根系至于300mL水中
模擬干旱脅迫條件	② 將乙組幼苗根系置于等量的20%PEG溶液中 將乙組幼苗根系置于等量的20%PEG溶液中
無(wú)關(guān)變量控制	將甲、乙兩組置于溫度、光照等條件適宜且相同的環(huán)境中培養(yǎng)8h,之后剪取兩組葉片放在液氮中儲(chǔ)存
③ 檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物量，估算目的基因的表達(dá)量 檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物量，估算目的基因的表達(dá)量	對(duì)葉片研磨、離心后，提取總RNA，以 AmDHN和 MtActin基因兩端脫氧核苷酸序列為依據(jù)設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，其中MtActin（一種細(xì)胞骨架蛋白）為內(nèi)參。擴(kuò)增產(chǎn)物用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，EB（澳化乙錠＞染色照相如圖。