利用基因工程和胚胎工程等技術培育轉基因奶牛的流程如圖所示，該轉基因奶牛分泌的乳汁內含有某種藥用蛋白。據圖分析并回答下列問題。

注：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ代表四種限制酶，箭頭指向的位置為限制酶的切割位置：Amp^r是氨芐青霉素抗性基因，Neo^r是G418抗性基因。
（1）①②過程需要用到的工具酶是

限制酶和DNA連接酶

限制酶和DNA連接酶

；③過程采用的方法是

顯微注射法

顯微注射法

。
（2）重組質粒上的抗生素抗性基因有利于篩選出含有目的基因的細胞。G418不能有效殺死受體細胞。而一定濃度的氨芐青霉素能有效殺死不具有Amp^r的受體細胞，結合該圖推測，過程①選用的兩種限制酶是

Ⅲ和Ⅳ

Ⅲ和Ⅳ

（選填圖中的編號），該圖的受精卵應在添加

氨芐青霉素

氨芐青霉素

（填“氨芐青霉素”或“G418”）的培養液中篩選。
（3）采集卵母細胞時，可用

促性腺

促性腺

激素處理良種母牛，使其排出更多的卵母細胞；進行過程⑥前要對采集到的精子進行獲能處理，方法是將其放在

一定濃度的肝素或鈣離子載體

一定濃度的肝素或鈣離子載體

溶液中進行誘導。
（4）經過篩選后的受精卵中不能檢測到該藥用蛋白，

不能

不能

（填能或不能）作為目的基因未導入受精卵染色體的依據，理由是

該藥用蛋白基因只能在轉基因動物的乳腺細胞內表達

該藥用蛋白基因只能在轉基因動物的乳腺細胞內表達

。