遺傳毒性物質常存在于被化學物質污染的水體,可損傷生物的DNA,嚴重威脅人類健康。研究人員通過基因工程改造大腸桿菌,以期篩選對遺傳毒性物質反應靈敏的工程菌株,用于水質檢測。
(1)大腸桿菌DNA中存在可被遺傳毒性物質激活的毒性響應啟動子序列。將毒性響應啟動子插入圖1所示表達載體的P區,獲得基因工程改造的大腸桿菌。當改造后的大腸桿菌遇到遺傳毒性物質時,RNA聚合酶RNA聚合酶識別并與啟動子結合,驅動噬菌體裂解基因(SRR) 轉錄轉錄,表達產物可使大腸桿菌裂解。
(2)研究人員選取啟動子sul準備與圖1表達載體連接。圖2顯示了啟動子sul內部存在的酶切位點,箭頭表示轉錄方向。

①據圖1、2信息,克隆啟動子sul時,在其A端和B端應分別添加限制性內切酶 XhoⅠ和SapⅠXhoⅠ和SapⅠ的酶切位點,從而確保啟動子sul可與已被酶切的表達載體正確連接。
②將重組表達載體導入大腸桿菌,置于含有 氨芐青霉素氨芐青霉素的選擇培養基中進行篩選、鑒定及擴大培養,獲得工程菌sul。
(3)研究人員陸續克隆了其他4種啟動子(rec、imu、qnr、cda),分別連入表達載體,用同樣的方法獲得導入重組載體的工程菌,以篩選最靈敏的檢測菌株。
①將5種工程菌和對照菌在LB培養基中培養一段時間后,檢測菌體密度,結果如圖3。圖中結果顯示 5種工程菌菌體數量增長趨勢與對照菌一致5種工程菌菌體數量增長趨勢與對照菌一致,說明工程菌在自然生長狀態下不會產生自裂解現象。
②上述菌株在LB培養基中生長2h時加入遺傳毒性物質,檢測結果如圖4。據圖可知,5種工程菌均啟動了對遺傳毒性物質的響應,應選擇工程菌 轉入rec啟動子的菌株轉入rec啟動子的菌株作為最優檢測菌株。
(4)下列關于該工程菌的敘述,正確的包括 ADAD。
A.該工程菌可能用于檢測土壤、蔬菜中的農藥殘留量
B.該毒性響應啟動子序列廣泛存在于自然界所有物種中
C.其表達產物可裂解大腸桿菌,檢測后的剩余菌液可直接倒掉
D.為長期保存該工程菌,應加入一定濃度的甘油凍存于-20℃
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】RNA聚合酶;轉錄;XhoⅠ和SapⅠ;氨芐青霉素;5種工程菌菌體數量增長趨勢與對照菌一致;轉入rec啟動子的菌株;AD
【解答】
【點評】
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發布:2024/4/20 14:35:0組卷:124引用:9難度:0.6
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