新冠病毒是一種RNA病毒，其主要通過其表面刺突蛋白（S蛋白）與人體細胞上的“血管緊張素轉化酶2（ACE2）”受體結合實現感染。各類新冠病毒疫苗的研發都是基于這個主要的理論基礎，即以S蛋白基因為靶點，通過表達S蛋白，誘導人體產生免疫能力，從而實現預防感染的目的。以下是兩條疫苗研究技術路線：
A.疫苗研究技術路線1：體外表達疫苗--重組疫苗。
提取新冠病毒RNA，獲取S蛋白基因，構建S蛋白基因表達載體，導入釀酒酵母，合成并分泌S蛋白質（疫苗），注射人體，產生免疫。
B.疫苗研究技術路線2：體內表達疫苗--病毒載體疫苗。
提取新冠病毒RNA，獲取S蛋白基因，將 S蛋白基因轉入復制缺陷型腺病毒的基因組內，獲得疫苗。接種該疫苗后，腺病毒載體會進入人體細胞，由于基因缺陷，腺病毒本身無法復制，但其內的S蛋白基因會啟動產生S蛋白，這種S蛋白會從細胞內轉移到細胞外，誘導人體產生免疫。
據上述材料結合所學知識，回答下列問題：
（1）兩條技術路線中，獲取S蛋白基因的方法是：提取病毒RNA，通過

逆轉錄

逆轉錄

 過程合成S蛋白基因，再用PCR技術擴增S蛋白基因。設計擴增S蛋白基因所需的引物時，不可以將一端引物設計為含GAATTC序列，理由是：

引物會與自身堿基互補配對，無法與模板鏈結合（引物與引物之間也可以形成雙鏈，引物會與自身堿基互補配對，降低引物與模板間結合的效率）

引物會與自身堿基互補配對，無法與模板鏈結合（引物與引物之間也可以形成雙鏈，引物會與自身堿基互補配對，降低引物與模板間結合的效率）

。
（2）技術路線1中，常使用兩種酶切割載體。這里的酶是

限制性核酸內切酶

限制性核酸內切酶

；與單酶切相比，優點是：

避免目的基因與質粒（運載體）的反向鏈接物，或者目的基因自身連接物與質粒自身連接物

避免目的基因與質粒（運載體）的反向鏈接物，或者目的基因自身連接物與質粒自身連接物

。體外表達技術在疫苗領域已經非常成熟，但由于S蛋白中含有受體酵母菌自身分泌的內源蛋白，所以

提純

提純

比較復雜；
（3）技術路線2中，相當于把人體細胞當作了疫苗工廠，大大簡化了疫苗生產過程。無法自我復制的腺病毒也會被人體免疫機制清理掉，提高了疫苗的

安全性

安全性

。但是絕大多數人成長過程中曾感染過腺病毒，短期內體內可能存在能中和腺病毒載體的

抗體

抗體

，從而

降低

降低

（用“加強/降低”作答）疫苗效果，這就是預存免疫。