限制酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的識別序列及其切割位點如表所示。某質粒、目的基因兩端相關限制酶的酶切位點分別如圖1、圖2所示。回答下列問題：
| 限制酶 | Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ | Ⅳ |
| 識別序列及切割位點 |
|
|
|
|
（1）只與一個五碳糖連接的磷酸基團稱為游離的磷酸基團，一個質粒分子含有
0
0
個游離的磷酸基團。圖示質粒經限制酶Ⅰ完全酶切后產生的DNA片段共含有 4
4
個游離的磷酸基團。（2）限制酶Ⅱ能斷開的是圖3中
a
a
（填字母）處的鍵。若經限制酶Ⅰ切割的DNA末端與經限制酶Ⅱ切割的DNA末端連接，則連接部位的6個堿基對序列為 
都不能
都不能
（填“都能”、“都不能”或“中只有一種能”）將其切開。（3）若用圖中的質粒和目的基因構建重組質粒，則應選用限制酶
Ⅱ、Ⅳ
Ⅱ、Ⅳ
共同切割，不選用另外兩種限制酶的原因分別是 質粒上不含限制酶Ⅲ的識別序列及其切割位點，選用限制酶1可能會使質粒中的啟動子丟失（或四環素基因是標記基因之一，若用限制酶I處理質粒，則會使該標記基因失去標記作用）
質粒上不含限制酶Ⅲ的識別序列及其切割位點，選用限制酶1可能會使質粒中的啟動子丟失（或四環素基因是標記基因之一，若用限制酶I處理質粒，則會使該標記基因失去標記作用）
。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】0；4；a；；都不能；Ⅱ、Ⅳ；質粒上不含限制酶Ⅲ的識別序列及其切割位點，選用限制酶1可能會使質粒中的啟動子丟失（或四環素基因是標記基因之一，若用限制酶I處理質粒，則會使該標記基因失去標記作用）
；都不能；Ⅱ、Ⅳ；質粒上不含限制酶Ⅲ的識別序列及其切割位點，選用限制酶1可能會使質粒中的啟動子丟失（或四環素基因是標記基因之一，若用限制酶I處理質粒，則會使該標記基因失去標記作用）【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：3引用：2難度：0.7
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（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6