蜘蛛絲是自然界中機械性能最好的天然蛋白纖維，其強度高于制作防彈衣的凱夫拉纖維，有廣泛的應用前景。但如何大量獲取蜘蛛絲的問題一直難以解決。2018年8月，中科院分子植物科學卓越創新中心利用基因工程技術成功在家蠶絲腺和蠶繭中大量表達蜘蛛絲蛋白。回答下列問題：
（1）構建基因表達載體時（如圖所示），需要在目的基因前后兩端分別引入 XbaⅠ和SacⅠXbaⅠ和SacⅠ的酶切位點，該方法比用同一種酶進行酶切的優勢是 防止目的基因自身環化，防止目的基因反向連接防止目的基因自身環化，防止目的基因反向連接（答出一點即可）。
（2）利用PCR技術擴增蜘蛛絲基因前，需根據目的基因的核苷酸序列設計 22種引物，進行PCR時需加熱至90～95℃然后冷卻至55～60℃，此操作的目的是 使DNA解鏈，然后使引物結合到互補DNA鏈上使DNA解鏈，然后使引物結合到互補DNA鏈上。
（3）為能從蠶絲中提取蛛絲蛋白，基因表達載體中目的基因的首段必須含有使其僅能在蠶的絲腺細胞中特異性表達的 啟動子啟動子。當其與 RNA聚合酶RNA聚合酶識別和結合，才能驅動轉錄過程，最終翻譯成功。
（4）在研究過程中，發現目的基因已經插入到蠶絲腺細胞染色體的DNA上，蠶絲中卻未能提取到蜘蛛絲，請分析原因及檢測方法 蛛絲蛋白基因未能正常進行轉錄，可用分子雜交技術檢測，蛛絲蛋白未能進行正常翻譯，可用抗原—抗體雜交技術檢測蛛絲蛋白基因未能正常進行轉錄，可用分子雜交技術檢測，蛛絲蛋白未能進行正常翻譯，可用抗原—抗體雜交技術檢測。
（5）研究人員發現若將蛛絲蛋白31號位的色氨酸替換為酪氨酸，蛛絲韌性可提高50%，此成果所用到的工程技術為 蛋白質工程蛋白質工程。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】XbaⅠ和SacⅠ；防止目的基因自身環化，防止目的基因反向連接；2；使DNA解鏈，然后使引物結合到互補DNA鏈上；啟動子；RNA聚合酶；蛛絲蛋白基因未能正常進行轉錄，可用分子雜交技術檢測，蛛絲蛋白未能進行正常翻譯，可用抗原—抗體雜交技術檢測；蛋白質工程
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：3引用：1難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
發布：2025/1/5 8:0:1組卷：6難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6