黏膜免疫系統(tǒng)作為第一道免疫防御屏障，能夠參與保護生物體免受病原體的感染。多聚免疫球蛋白受體（pIgR）作為黏膜免疫防御的一個關(guān)鍵因子，能夠介導(dǎo)免疫球蛋白跨過上皮細胞進行轉(zhuǎn)運和分泌，發(fā)揮免疫球蛋白在黏液中清除病原體和毒素的作用。研究人員從大菱鲆提取pIgR基因，針對不同器官組織開展了pIgR基因研究（如圖），其中DEPC物質(zhì)可與RNA酶結(jié)合使酶發(fā)生變性。
（1）研究人員通過mRNA得到cDNA時所需要的酶是 逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶，提取過程加入DEPC物質(zhì)作用是 防止RNA被降解防止RNA被降解。
（2）為將pIgR基因以正確方向插入質(zhì)粒需要雙酶切，這就要求在設(shè)計引物時，需在引物的5'端加入相應(yīng)的酶切位點。已知a鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，引物1的5'端酶切位點的堿基序列為GAATTC，則引物2的5'端酶切位點的堿基序列為 GCGGCCGCGCGGCCGC，理由是 a鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，根據(jù)mRNA的合成方向，引物2的5'端靠近啟動子，應(yīng)有NotⅠ的酶切位點a鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，根據(jù)mRNA的合成方向，引物2的5'端靠近啟動子，應(yīng)有NotⅠ的酶切位點。
（3）構(gòu)建pIgR基因表達載體后，與處于感受態(tài)的大腸桿菌菌株混合，pIgR基因表達載體進入菌體內(nèi)，此過程稱為 轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化。然后將菌液涂布在含有 氨芐青霉素氨芐青霉素的LB固體培養(yǎng)基培養(yǎng)，加入誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)pIgR基因在大腸桿菌中表達，提取、純化蛋白質(zhì)。
（4）在整個實驗過程中多次使用PCR技術(shù)，如利用PCR技術(shù)擴增pIgR基因時，需要在反應(yīng)體系中加入 模板模板、4種脫氧核苷三磷酸4種脫氧核苷三磷酸、引物、耐高溫的DNA聚合酶、緩沖液等物質(zhì)，設(shè)置PCR儀器的控制參數(shù)，啟動三步驟擴增過程，在三個步驟中溫度最低是 復(fù)性復(fù)性。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶；防止RNA被降解；GCGGCCGC；a鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，根據(jù)mRNA的合成方向，引物2的5'端靠近啟動子，應(yīng)有NotⅠ的酶切位點；轉(zhuǎn)化；氨芐青霉素；模板；4種脫氧核苷三磷酸；復(fù)性
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/7/20 8:0:8組卷：5引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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