引起人類產生埃博拉出血熱的埃博拉病毒（EBOV），是一種單鏈RNA病毒，某研究團隊利用其跨膜表面糖蛋白（GP），以重組腺病毒為載體研發了埃博拉疫苗。腺病毒是一種DNA病毒，腺病毒載體包括骨架質粒（攜帶腺病毒的主要功能基因）和穿梭質粒（能轉移外源基因到骨架質粒上）。如圖為重組埃博拉疫苗制作的部分流程示意圖，已知四種限制性核酸內切酶KpnⅠ、BamHⅠ、NheⅠ、BgⅢ的識別序列和酶切位點分別為：GGTAC^↓C、G^↓GATCC、G^↓CTAGC、A^↓GATCT．請回答下列問題：

（1）為了判斷是否感染EBOV，利用探針對疑似患者進行核酸檢測，其檢測方法采用了

分子雜交

分子雜交

技術。為了提高檢測的準確性，需從EBOV核酸中選取具有

特異性

特異性

的序列作為探針設計的模板。
（2）從EBOV基因組中分離出的GP基因不能直接與穿梭質粒重組，其原因是

GP基因是單鏈RNA結構

GP基因是單鏈RNA結構

；而過程①獲得的GP基因片段因兩端缺乏

相應的限制酶酶切位點

相應的限制酶酶切位點

也不能直接與穿梭質粒重組。研究人員在過程①獲得的GP基因片段下游添加了含“-AGATCT-”的序列，則需在其上游添加包含有

-GGTACC-

-GGTACC-

序列的片段，以便與穿梭質粒重組，且能避免GP基因反向連接。
（3）實際操作中需利用限制酶將環狀的重組穿梭質粒切成兩個核苷酸片段，則切割前后含有的游離磷酸基團數目變化為

0→4

0→4

。將含GP基因的核苷酸片段與骨架質粒通過過程④完成重組，再在含

卡那霉素

卡那霉素

的平板上培養，篩選出含重組骨架質粒的陽性菌。
（4）過程⑤中，利用脂質體將重組骨架質粒導入到人的胚胎腎細胞HEK293中，其運用的原理是

膜的流動性

膜的流動性

，再將成功導入的細胞HK293培養一段時間，獲得大量重組腺病毒，為疫苗的進一步研究奠定基礎。