人體肝臟細胞中的乙醛脫氫酶2（ALDH2）是人體酒精代謝中的關鍵酶。如圖表示利用基因工程生產ALDH2過程中使用的質粒及目的基因的部分結構，β-半乳糖苷酶能分解無色的X-gal產生藍色物質。圖中氨芐青霉素抗性基因、β-半乳糖苷酶基因、目的基因的序列中分別含有1種、5種、2種限制酶的識別序列及切割位點。
（1）構建基因表達載體時一般至少需要兩種限制酶，以防止 質粒或目的基因自身環化質粒或目的基因自身環化和 目的基因與質粒反向連接目的基因與質粒反向連接。設計啟動子的作用是 使目的基因正常轉錄（表達）使目的基因正常轉錄（表達）。
（2）為了使目的基因與載體能正確連接，應在擴增的目的基因A、B兩端分別引入 XhoⅠXhoⅠ和 MunⅠMunⅠ兩種不同限制酶的識別序列。
（3）MunⅠ酶切后的末端與EcoRⅠ酶切后的末端能連接，原因是 MunⅠ酶與EcoRI酶切后的黏性末端相同（可以互補配對）MunⅠ酶與EcoRI酶切后的黏性末端相同（可以互補配對）。
（4）以大腸桿菌為受體細胞，在篩選插入ALDH2基因成功的受體細胞時，除營養物質外，還要在培養基中加入的物質有 氨芐青霉素和X-gal氨芐青霉素和X-gal。
（5）研究發現如果將ALDH2的第36位的氨基酸替換，可提高其催化效率。請寫出通過蛋白質工程技術獲取高效ALDH2基因的操作流程：從預期的蛋白質功能（高效ALDH2）出發→設計預期的蛋白質結構（高效ALDH2結構）→推測應有的氨基酸序列→找到相對應的脫氧核苷酸序列從預期的蛋白質功能（高效ALDH2）出發→設計預期的蛋白質結構（高效ALDH2結構）→推測應有的氨基酸序列→找到相對應的脫氧核苷酸序列。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】質粒或目的基因自身環化；目的基因與質粒反向連接；使目的基因正常轉錄（表達）；XhoⅠ；MunⅠ；MunⅠ酶與EcoRI酶切后的黏性末端相同（可以互補配對）；氨芐青霉素和X-gal；從預期的蛋白質功能（高效ALDH2）出發→設計預期的蛋白質結構（高效ALDH2結構）→推測應有的氨基酸序列→找到相對應的脫氧核苷酸序列
【解答】
【點評】
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發布：2024/12/7 0:0:1組卷：11引用：2難度：0.5
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