大麗輪枝菌（一種絲狀真菌）是引起棉花黃萎病的主要病原菌，因此對其研究至關重要。為觀察大麗輪枝菌對棉花根的侵染路徑，研究人員通過基因工程培育出了表達綠色熒光蛋白的轉基因菌株。圖1是其主要過程，分析回答：
（1）據圖1分析，過程①表示利用 PCRPCR技術獲取和擴增兩端含有酶切位點的綠色熒光蛋白基因（sGFP），為保證sGFP正確插入到質粒中，還需要在目的基因兩端添加 HindⅢ和BamHⅠHindⅢ和BamHⅠ限制酶的識別序列。
（2）過程②表示基因工程的第二個步驟：目的基因表達載體的構建目的基因表達載體的構建。首先需要利用上述兩種限制酶對sGFP片段和質粒進行剪切，圖中質粒大片段的左端產生的黏性末端為 （5′→3′）為AGCT（5′→3′）為AGCT。然后利用 DNA連接酶DNA連接酶進行重組質粒的連接。
（3）此研究中利用 農桿菌轉化農桿菌轉化法將sGPP導入大麗輪枝菌。為了獲得所需的農桿菌，可用 CaCl2CaCl2處理農桿菌，然后將重組質粒導入其中，接著在含有 潮霉素潮霉素的選擇培養基上進行篩選，利用 平板劃線法或稀釋涂布平板平板劃線法或稀釋涂布平板法進行接種，培養后獲得菌落。
（4）選擇不同的農桿菌菌落，分別提取細菌質粒DNA，并用上述限制酶完全酶切后電泳，結果如圖2，請判斷 第2第2泳道為重組質粒的酶切結果，判斷依據是 泳道2中除了質粒大片段外，另外的DNA片段的長度與目的基因的相同泳道2中除了質粒大片段外，另外的DNA片段的長度與目的基因的相同。
（5）在獲得高表達的轉基因大麗輪枝菌后，將其接種到棉花根部，通過持續觀察 綠色熒光蛋白出現的位置可確定其對棉花根部的侵染路徑綠色熒光蛋白出現的位置可確定其對棉花根部的侵染路徑 以確定其對棉花根部的侵染路徑，為棉花黃萎病的治療提供依據。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】PCR；HindⅢ和BamHⅠ；目的基因表達載體的構建；（5′→3′）為AGCT；DNA連接酶；農桿菌轉化；CaCl2；潮霉素；平板劃線法或稀釋涂布平板；第2；泳道2中除了質粒大片段外，另外的DNA片段的長度與目的基因的相同；綠色熒光蛋白出現的位置可確定其對棉花根部的侵染路徑
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：21引用：1難度：0.6
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（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
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