啟動子可分為組成型啟動子和誘導型啟動子，35S啟動子是組成型啟動子，能夠持續、高效地啟動目的基因在植物各種組織中表達，但往往也會阻礙植物的生長發育，Rd29A啟動子是一種逆境誘導型啟動子。沙冬青脫水素基因（AmDHN基因）能使植株具有較強的抗旱作用。科研人員構建Rd29A啟動子驅動AmDHN基因表達的載體，過程如圖1。再利用農桿菌轉化法轉化“敖漢苜蓿”培育耐旱新品種，以期在干旱地區發展苜蓿產業。neor是新霉素抗性基因，aadA是鏈霉素抗性基因。請回答下列問題：
| 限制酶 | BclI | SacI | BamHI | PstI | SmaI |
| 識別序列和切割位點 | T↓GATCA | GAGCT↓C | G↓GATCC | CTGCA↓G | CCC↓GGG |
脫氧核苷酸
脫氧核苷酸
。能識別啟動子的酶是RNA聚合酶
RNA聚合酶
。（2）如圖2是科研人員擴增Rd29A啟動子所設計的引物，根據引物的堿基序列及限制酶的識別序列分析，構建載體2時選用的限制酶是
SmaⅠ和SacⅠ
SmaⅠ和SacⅠ
。
（3）構建載體3時，選用
BclⅠ、SacⅠ
BclⅠ、SacⅠ
酶切割載體1、2成功率較高。研究人員在保存目的基因AmDHN時，構建載體4導入大腸桿菌的優點是①②④
①②④
。①穩定保存
②準確復制
③快速表達
④方便取用
（4）載體5需先轉入
農桿菌
農桿菌
后再轉化苜蓿，轉化后應在培養基中添加新霉素
新霉素
篩選轉化成功的愈傷組織。（5）為檢測轉基因苜蓿中AmDHN基因的轉錄水平，挑選10株轉基因植株，利用自來水和20% PEG（模擬干旱條件）處理8h,提取RNA通過RT-PCR 檢測 AmDHN基因和 MtActin基因（一種骨架蛋白基因）的表達水平，其結果如圖3：
①選擇MtActin基因轉錄水平作為參照的依據是
MtActin基因在各種細胞中表達相對恒定
MtActin基因在各種細胞中表達相對恒定
。②自來水處理和20% PEG條件下的Am DHN基因表達水平的差異說明
干旱能誘導Rd29A啟動子啟動轉錄
干旱能誘導Rd29A啟動子啟動轉錄
。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】脫氧核苷酸；RNA聚合酶；SmaⅠ和SacⅠ；BclⅠ、SacⅠ；①②④；農桿菌；新霉素；MtActin基因在各種細胞中表達相對恒定；干旱能誘導Rd29A啟動子啟動轉錄
【解答】
【點評】
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發布：2024/4/20 14:35:0組卷：45引用：2難度：0.5
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（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
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