神經生長因子（NGF）對神經細胞的增殖和分化有重要作用，對非神經性細胞的生長和活性有輔助作用，對神經性和非神經性疾病都有良好的潛在治療作用?？蒲腥藛T通過轉基因方法制備能在腮腺中特異性表達人源神經生長因子（hNGF）的轉基因豬，并采集該轉基因豬分泌的唾液，分離純化hNGF用于人類神經性疾病的治療。回答下列問題：
（1）步驟一：將hNGF基因序列替換位于載體XhoⅠ和NotⅠ酶切位點之間的序列，構建含人源NGF的基因表達載體。該步驟中選擇XhoⅠ和NotⅠ兩種限制酶的優點是 避免切制后目的基因和質粒發生自身環化，且能保證正確連接避免切制后目的基因和質粒發生自身環化，且能保證正確連接，在hNGF基因的兩端也必須含有XhoⅠ和NotⅠ酶識別的序列，添加的方法是 在對hNGF基因進行PCR擴增時，將兩種限制酶的識別序列合成在兩種引物中在對hNGF基因進行PCR擴增時，將兩種限制酶的識別序列合成在兩種引物中。
（2）步驟二：將基因表達載體導入豬胎兒成纖維細胞。該步驟使用的方法是 顯微注射法顯微注射法，目的是 使hNGF基因進入受體細胞，并在受體細胞中維持穩定和表達使hNGF基因進入受體細胞，并在受體細胞中維持穩定和表達。
（3）步驟三：重構胚的構建。篩選成功導入重組質粒的豬胎兒成纖維細胞，進行細胞培養，該過程中會出現 細胞貼壁和接觸抑制細胞貼壁和接觸抑制的現象，需要用胰蛋白酶進行處理并及時分瓶培養。獲得的細胞作為核供體注入 去核的豬卵母細胞去核的豬卵母細胞中。
（4）步驟四：轉基因克隆豬的獲得。重構胚發育到 桑葚胚或囊胚桑葚胚或囊胚后經胚胎移植導入代孕豬子宮內，獲得的轉基因豬的遺傳物質來自 豬成纖維細胞的細胞核、去核卵母細胞的細胞質和人的hNGF基因豬成纖維細胞的細胞核、去核卵母細胞的細胞質和人的hNGF基因。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】避免切制后目的基因和質粒發生自身環化，且能保證正確連接；在對hNGF基因進行PCR擴增時，將兩種限制酶的識別序列合成在兩種引物中；顯微注射法；使hNGF基因進入受體細胞，并在受體細胞中維持穩定和表達；細胞貼壁和接觸抑制；去核的豬卵母細胞；桑葚胚或囊胚；豬成纖維細胞的細胞核、去核卵母細胞的細胞質和人的hNGF基因
【解答】
【點評】
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發布：2024/8/18 3:0:1組卷：3引用：1難度：0.7
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
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2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6