尖孢鐮刀菌會引起黃瓜枯萎病的發生。研究人員擬從土壤中分離篩選出對黃瓜枯萎病有抑制效果的拮抗細菌（jb9菌株），以期為黃瓜枯萎病提供生物防治。實驗過程如圖1所示，回答下列問題：
（1）將土壤樣品制成懸浮液，步驟I使用的接種方法是 平板劃線法平板劃線法，純化培養的關鍵是 無菌操作無菌操作。培養基a必備的營養物質有 碳源、氮源、水和無機鹽碳源、氮源、水和無機鹽。
（2）為驗證jb9菌株的抑菌效果，需要先將尖孢鐮刀菌均勻地接種在培養基b表面，則接種方法是 稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法。濾紙組作為對照組，用 無菌水無菌水處理濾紙。
（3）jb9菌株能合成分泌真菌細胞壁降解酶（HCD），抑制尖孢鐮刀菌（真菌）的生長。科研人員將獲取的HCD基因導入黃瓜細胞，培育抗枯萎病的轉基因植株。含HCD基因的DNA片段、質粒的結構及限制酶切割位點如圖2所示。
①根據題意，將HCD基因與圖示的質粒重組，應選用的限制酶是 BamHI和HindⅢBamHI和HindⅢ。在篩選培養基上，要加入 氨芐青霉素氨芐青霉素來篩選含有HCD基因的受體細胞。將受體細胞培育后獲得轉基因植株。
②為確定轉HCD基因植株能抗枯萎病，在個體水平上的檢測方法是 用尖孢鐮刀菌感染轉HCD基因的植株，觀察其抗病情況用尖孢鐮刀菌感染轉HCD基因的植株，觀察其抗病情況。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】平板劃線法；無菌操作；碳源、氮源、水和無機鹽；稀釋涂布平板法；無菌水；BamHI和HindⅢ；氨芐青霉素；用尖孢鐮刀菌感染轉HCD基因的植株，觀察其抗病情況
【解答】
【點評】
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（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
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