新型冠狀病毒是一種帶包膜的RNA病毒，膜表面的刺突蛋白（S蛋白）與宿主細胞膜表面受體ACE2結合，介導病毒進入宿主細胞。進一步研究發現，RBD是S蛋白中負責和受體ACE2結合的關鍵蛋白。基于以上研究某科研團隊研發了一種重組新冠病毒疫苗（也叫重組亞單位疫苗），制備過程如下，回答下列問題。

（1）該疫苗的制備過程中，涉及的現代生物技術有

基因工程、動物細胞培養、蛋白質的分離提純

基因工程、動物細胞培養、蛋白質的分離提純

。（答出兩個即可）
（2）逆轉錄獲得的RBD蛋白基因不含有限制酶識別序列，這就需要在對目的基因進行PCR擴增時，在設計的目的基因引物的一端加裝限制酶的識別序列，應加在引物的

5'

5'

端（填“3'”或“5'”），為了避免目的基因自身環化，最好在兩種引物的一端加裝

不同

不同

（填“相同”或“不同”）限制酶的識別序列。
（3）使RBD蛋白基因在受體細胞中表達，需要借助載體而不能直接將目的基因導入受體細胞，原因是

目的基因無復制原點、無表達所需啟動子等，直接導入受體細胞不能表達

目的基因無復制原點、無表達所需啟動子等，直接導入受體細胞不能表達

（答出兩點即可）。
（4）體外培養CHO細胞時，需要提供無菌、無毒的環境，即對

培養液和培養用具

培養液和培養用具

進行無菌處理。培養過程中還要定期更換培養液，其目的是

清除代謝產物，防止對細胞造成危害

清除代謝產物，防止對細胞造成危害

。
（5）為了確定目的基因是否表達，應從受體細胞中提取

RBD蛋白

RBD蛋白

（填“RBD蛋白”或“所有蛋白質”）來檢測。