如圖1是獲取用于構建基因表達載體的含人生長激素基因的DNA片段（DNA復制子鏈延伸方向是5′→3′，轉錄方向為左→右）示意圖，圖2是所用質粒示意圖，其上的Amp^r表示青霉素抗性基因，Tet^t表示四環素抗性基因。有關限制酶的識別序列和酶切位點如表。請據圖回答：

限制酶識別序列和酶切位點表

限制酶	HindⅢ	BamHⅠ	PstⅠ	EcoRⅠ	SmaⅠ	BglⅡ
識別序列（5′→3′）	A↓AGCTT	G↓GATCC	C↓TGCAG	G↓AATTC	CCC↓GGG	A↓GATCT

（1）①過程催化形成磷酸二酯鍵的酶有

反轉錄酶和DNA聚合酶

反轉錄酶和DNA聚合酶

，合成的人生長激素基因中

有

有

（選填“有”或“無”）與終止密碼子相應的堿基序列。
（2）引物1由5′→3′的堿基序列為

AGATCTGCATCCTCCAGG

AGATCTGCATCCTCCAGG

，引物2應含有限制酶

BamHⅠ

BamHⅠ

的識別序列；從圖1的過程②開始進行PCR擴增，第六次循環結束時，圖中用于構建基因表達載體的DNA片段所占比例是

13

16

13

16

。
（3）在構建表達載體的過程中對圖中質粒、DNA片段進行合適的完全酶切后，向兩者的混合物中加入DNA連接酶，若只考慮DNA切段兩兩連接，則混合物中將形成

6

6

種環狀DNA。
（4）2018年11月基因編輯嬰兒事件震驚了世界，輿論一片嘩然，某科研團隊利用“CRISPR/Cas9”技術將受精卵中的艾滋病病毒受體基因CCR5進行修改，擬培育出具有艾滋病免疫能力的基因編輯嬰兒。圖3為向導RNA引導Cas9蛋白切割CCR5基因（目標DNA）示意圖。
①向導RNA的合成需要

RNA聚合

RNA聚合

酶。Cas9蛋白是一種

限制

限制

酶。
②“GRISPR/Cas9”技術，是利用

顯微注射

顯微注射

法將Cas9蛋白和特定的引導序列導入受精卵中發揮基因編輯作用。
③基因編輯嬰兒引起輿論的關注，很多科學家表示反對，請給出合理的理由

細胞內DNA上可能不止一個Cas9酶識別和切割位點，可能導致脫靶

細胞內DNA上可能不止一個Cas9酶識別和切割位點，可能導致脫靶

。