IKK激酶由IKKα、IKKβ和IKKγ三種亞基組成，該酶參與動物體內免疫細胞的分化。臨床上發現某重癥聯合免疫缺陷（SCID）患兒IKKB基因編碼區第1183位堿基T突變為C，導致IKKβ上第395位酪氨酸被組氨酸代替。為研究該患兒發病機制，研究人員應用大引物PCR 定點誘變技術培育出SCID模型小鼠，主要過程如圖1、2。分析回答：

過程	實驗目的	步驟要點
導入	a.處理突變基因與載體
	b.構建重組載體	利用DNA連接酶催化突變基因和載體連接
	e.導入目的基因	利用顯微注射法將重組載體注入小鼠受精卵 利用顯微注射法將重組載體注入小鼠受精卵
發育	d.獲取早期胚胎	利用專用培養液培養受精卵，并檢測其發育狀況
	e.代孕獲得小鼠	利用合適的早期胚胎進行胚胎移植 利用合適的早期胚胎進行胚胎移植
	f.鑒定、薄選F0小鼠	利用PCR鑒定基因，篩選出雜合鼠F0

（1）在圖1獲取突變基因過程中，需要以下3種引物：
引物A：5'-CCCCAACGGAAAGTGTCA-3'（下劃線字母為突變堿基）
引物B：5'-TAAGCTTCGAACATCCTA-3'（下劃線部分為限制酶HindⅢ識別序列）
引物C：5'-GTGAGCTCGCTGCCCCAA-3′（下劃線部分為限制酶SacⅠ識別序列）
則PCR₁中使用的引物有

引物A和引物C

引物A和引物C

，PCR₂中使用的引物有

引物B

引物B

和圖中大引物的

②

②

（①/②）鏈。
（2）在PCR反應體系中，需要加入引物和IKKB基因外，還需要加入

Taq酶（耐高溫DNA聚合酶）、4種脫氧核苷酸、緩沖液、Mg²⁺

Taq酶（耐高溫DNA聚合酶）、4種脫氧核苷酸、緩沖液、Mg²⁺

 等。PCR中盡可能提高退火溫度以減少

非目標基因的獲得

非目標基因的獲得

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（3）圖2模型鼠培育過程中雜合模型鼠（F₀）的培育涉及了一系列現代生物技術，如表是其中的一些步驟，請根據題意完成表格內容。
（4）根據圖2雜交結果，可以確認突變基因已經較穩定地整合到小鼠細胞的

核DNA（染色體）

核DNA（染色體）

上，在遺傳時遵循

基因分離

基因分離

定律。研究人員對三種基因型小鼠胸腺淋巴細胞中組成IKK激酶的三種亞基進行提純和電泳，結果如圖3。請依據此結果提出SCID患者免疫缺陷產生的機制：

IKKB基因突變導致IKKβ含量減少，IKK激酶活力降低，T細胞減少

IKKB基因突變導致IKKβ含量減少，IKK激酶活力降低，T細胞減少

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