人乳鐵蛋白（hLF）對細菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人員開展人乳鐵蛋白基因乳腺特異性表達載體構建及轉染研究，主要流程如下圖。圖中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相關限制酶切點，neor為新霉素抗性基因，BLG基因為B乳球蛋白基因，GFP基因為綠色熒光蛋白基因。請回答下列問題。
（1）過程①中，不能從人肌肉細胞中提取RNA用于RT-PCR，是因為 hLF基因在人肌肉細胞中不轉錄（表達）hLF基因在人肌肉細胞中不轉錄（表達）。熒光RT﹣PCR技術所用的試劑盒中通常都應該含有 逆（反）轉錄酶逆（反）轉錄酶、Taq酶、熒光標記的核酸探針、引物、dNTP、緩沖體系。
（2）在RT-PCR過程中，加入的引物需在 5'5'端添加 SalⅠ和BamHⅠSalⅠ和BamHⅠ兩種限制酶的識別序列，便于hLF基因插入pEB中。利用RT-PCR技術獲取的目的基因 能能（填“能”或“不能”）在物種之間交流；該技術還可用于對某些微量RNA病毒的檢測，可提高檢測的靈敏度，原因是 增加了待測RNA逆轉錄產生的DNA的數量（或濃度），便于檢測增加了待測RNA逆轉錄產生的DNA的數量（或濃度），便于檢測。若利用PCR技術擴增某基因片段時消耗了126個引物分子，則該過程擴增了 66次。
（3）過程②中，hLF基因插入到BLG基因之后的目的是 使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細胞中表達（或使目的基因表達）使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細胞中表達（或使目的基因表達）；該過程中，兩個基因共用的調控元件是BLG基因的 啟動子啟動子。
（4）PEBL質粒導入受體細胞的方法是 脂質體介導脂質體介導，依據的主要原理是 生物膜具有一定的流動性生物膜具有一定的流動性。
（5）將轉染后的山羊乳腺上皮細胞先置于含新霉素的培養液中培養，再利用熒光顯微鏡觀察山羊乳腺上皮細胞中 是否有綠色熒光是否有綠色熒光，以篩選出轉染成功的細胞。該過程 不能不能（填“能”或“不能”）區分普通質粒或重組質粒，接下來還可采用 分子雜交分子雜交技術檢驗基因是否成功轉錄。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】hLF基因在人肌肉細胞中不轉錄（表達）；逆（反）轉錄酶；5'；SalⅠ和BamHⅠ；能；增加了待測RNA逆轉錄產生的DNA的數量（或濃度），便于檢測；6；使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細胞中表達（或使目的基因表達）；啟動子；脂質體介導；生物膜具有一定的流動性；是否有綠色熒光；不能；分子雜交
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：8引用：2難度：0.6
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2．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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