PHB2蛋白具有抑制細胞增殖的作用。為初步探究某動物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細胞增殖的原因，研究者從基因數據庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列（簡稱phb2基因），利用大腸桿菌表達該蛋白。回答下列問題：
（1）為獲取phb2基因，提取該動物肝臟組織的 總RNA總RNA，再經 逆轉錄逆轉錄過程得到cDNA，將其作為PCR反應的模板，并設計一對特異性引物來擴增目的基因。與生物體內的DNA聚合酶相比，PCR技術中所用的DNA聚合酶特點是 耐高溫耐高溫。
（2）圖1為所用載體圖譜示意圖，質粒DNA含有啟動子，啟動子是 RNA聚合酶RNA聚合酶識別并結合的位點。質粒DNA分子上有復制原點，可以保證質粒在受體細胞中能 準確進行復制準確進行復制。
| 名稱 | 識別序列及切割位點 | 名稱 | 識別序列及切割位點 |
| HindⅢ | A↓AGCTT | EcoRⅠ | G↓AATTC |
| PvitⅡ | CAG↓CTG | PstⅠ | CTGC↓AG |
| KpnⅠ | G↓GTACC | BamHⅠ | G↓GATCC |
（3）構建基因表達載體需要用到限制酶和DNA連接酶，其中，DNA連接酶催化目的基因片段與質粒載體片段之間形成的化學鍵是
磷酸二酯鍵
磷酸二酯鍵
。圖1中限制酶的識別序列及切割位點見圖2，為使phb2基因（該基因序列不含圖1中限制酶的識別序列）與載體正確連接，在擴增的phb2基因兩端分別引入 EcoRⅠ
EcoRⅠ
和 PvitⅡ
PvitⅡ
兩種不同限制酶的識別序列。經過這兩種酶酶切的phb2基因和載體進行連接時，可選用 T4DNA連接酶
T4DNA連接酶
（填“E?coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）。（4）轉化前需用
Ca2+
Ca2+
處理大腸桿菌細胞，使其處于 感受態
感受態
，以提高轉化效率。將轉化后的大腸桿菌接種在含 氨芐青霉素
氨芐青霉素
的培養基上進行培養。【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】總RNA；逆轉錄；耐高溫；RNA聚合酶；準確進行復制；磷酸二酯鍵；EcoRⅠ；PvitⅡ；T4DNA連接酶；Ca2+；感受態；氨芐青霉素
【解答】
【點評】
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發布：2024/9/5 5:0:8組卷：18引用：2難度：0.6
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