基因敲除又稱基因打靶，該技術通過外源DNA與染色體DNA之間的同源重組，進行精確的定點修飾和基因改造，具有專一性強、染色體DNA可與目的片段共同穩定遺傳等特點?？捎糜诨蚬δ艿难芯亢蛦位蜻z傳病的治療。為研究小鼠細胞中基因X的功能，科學家通過同源重組法將小鼠胚胎干細胞中的基因X的活性消除并獲得嵌合體小鼠。在制備置換載體時，將neor基因（抗新霉素基因）作為置換基因X的插入突變，同時在neor基因外側添加HSV-tk基因，該基因的表達產物能將DHPG轉化為有毒物質而使細胞死亡，如圖甲所示。置換載體導入ES細胞后，可發生同源重組和非同源重組，如圖乙所示。
（1）根據圖甲可知，在構建基因X的置換載體時，需用相同的限制酶限制酶酶切割基因X和neor基因neor基因，該酶的切割位點應位于基因X的內部和neor基因的兩端基因X的內部和neor基因的兩端，用相同酶切的目的是產生相同的黏性末端，便于被DNA連接酶連接產生相同的黏性末端，便于被DNA連接酶連接。
（2）ES細胞在功能上具有的特征是發育的全能性發育的全能性，常用顯微注射顯微注射技術將置換載體導入ES細胞，將置換載體導入ES細胞后，如何將發生同源重組的ES細胞篩選出來？并簡述理由。方法：在培養基中加入新霉素和DHPG，培養導入置換載體的細胞在培養基中加入新霉素和DHPG，培養導入置換載體的細胞；理由：未成功導入的ES細胞中不含neor基因，不抗新霉素，所以在培養基中無法存活。成功導入，但發生非同源重組的ES細胞中，HSK-tk基因可以表達，其產物會將培養基中的DHPG轉化為有毒物質從而殺死ES細胞。只有發生同源重組的細胞，含有neor基因，同時無HSV-tk基因，可以在培養基中存活未成功導入的ES細胞中不含neor基因，不抗新霉素，所以在培養基中無法存活。成功導入，但發生非同源重組的ES細胞中，HSK-tk基因可以表達，其產物會將培養基中的DHPG轉化為有毒物質從而殺死ES細胞。只有發生同源重組的細胞，含有neor基因，同時無HSV-tk基因，可以在培養基中存活。
（3）將嵌合體胚胎移植到受體小鼠并能在受體小鼠內存活的原因是：受體對外來胚胎基本上不發生免疫排斥反應受體對外來胚胎基本上不發生免疫排斥反應。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】限制酶；neor基因；基因X的內部和neor基因的兩端；產生相同的黏性末端，便于被DNA連接酶連接；發育的全能性；顯微注射；在培養基中加入新霉素和DHPG，培養導入置換載體的細胞；未成功導入的ES細胞中不含neor基因，不抗新霉素，所以在培養基中無法存活。成功導入，但發生非同源重組的ES細胞中，HSK-tk基因可以表達，其產物會將培養基中的DHPG轉化為有毒物質從而殺死ES細胞。只有發生同源重組的細胞，含有neor基因，同時無HSV-tk基因，可以在培養基中存活；受體對外來胚胎基本上不發生免疫排斥反應
【解答】
【點評】
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發布：2024/6/27 10:35:59組卷：28引用：1難度：0.6
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6